病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-02-15; 12(2): 306-310
Published online 2004-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i2.306
基因表达谱芯片筛选NS5ATP3转染细胞差异表达基因
刘妍, 杨倩, 成军, 王建军, 纪冬, 党晓燕, 王春花
刘妍, 杨倩, 成军, 王建军, 纪冬, 党晓燕, 王春花, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
刘妍, 女, 1973-01-15生, 辽宁省海城市人, 满族, 1995年北京医科大学毕业, 军事医学科学院免疫学专业2002级硕士学位研究生, 助理研究员. 主要从事肝炎病毒的分子生物学与病毒性肝炎的发病机制的研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689, 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063, 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038, 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138, 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-07-12
修回日期: 2003-08-10
接受日期: 2003-08-16
在线出版日期: 2004-02-15
Abstract

目的: 应用基因芯片技术, 检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活基因NS5ATP3的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响, 进一步阐明NS5ATP3蛋白可能的分子生物学功能.

方法: 设计并合成NS5ATP3基因序列特异性的引物, 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS5ATP3蛋白编码基因片段, 以常规的分子生物学技术将获得的NS5ATP3编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定, 构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP3. 以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取mRNA, 逆转录为cDNA, 与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析.

结果: 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定, 证实准确无误. 提取高质量的mRNA, 逆转录为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1 152个基因表达谱的筛选中, 发现有6个基因表达水平显著上调, 18个基因表达水平显著下调.

结论: 应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS5ATP3转染细胞后差异表达基因, 为进一步阐明NS5ATP3蛋白可能的生物学功能提供依据.

Keywords: N/A