研究快报
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世界华人消化杂志. 2004-12-15; 12(12): 2898-2901
Published online 2004-12-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i12.2898
全人源肝癌噬菌体单链抗体库的鉴定及筛选
薛国柱, 窦科峰, 赵爱志, 药立波
薛国柱, 窦科峰, 赵爱志, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆外科 陕西省西安市 710032
药立波, 中国人民解放军第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 陕西省西安市 710032
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30371399
通讯作者: 窦科峰, 710032, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆外科. gdwk@fmmu.edu.cn
电话: 029-83375259
收稿日期: 2004-09-18
修回日期: 2004-09-30
接受日期: 2004-10-11
在线出版日期: 2004-12-15
Abstract

目的: 对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定, 筛选肝癌抗体, 同时对抗体的活性进行鉴定.

方法: PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率. 先以人成纤维细胞黏附后再以肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮"黏附-洗脱-扩增"的亲和筛选. 将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定; 通过ELISA法鉴定其与人肝癌细胞的结合活性.

结果: ScFv基因插入率为70%. 在亲和筛选过程中, 肝癌噬菌体单链抗体得到富集, 收获率逐轮得到提高, 第3轮为第1轮的214倍. 筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定后, 均可检测到目的基因. 得到3株特异性肝癌单链抗体.

结论: 利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因, 且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性.

Keywords: N/A