病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-01-15; 12(1): 54-57
Published online 2004-01-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i1.54
丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因6的反式激活基因的筛选
王建军, 刘妍, 成军, 杨倩, 纪冬, 党晓燕, 王春花
王建军, 刘妍, 成军, 杨倩, 纪冬, 党晓燕, 王春花, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
王建军, 男, 1975-60-17生, 汉族, 吉林省通化市人, 1999年第一军医大学本科毕业, 现为军医进修学院2001级内科传染病学专业硕士研究生. 主要从事肝炎病毒蛋白的反式调节作用研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-06-25
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
Abstract

目的: 筛选与克隆NS5A反式激活的新型靶基因NS5ATP6的反式激活基因, 探讨其可能存在的调节功能.

方法: 应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin-formatics)技术筛选并克隆NS5ATP6反式激活的新型靶基因.以NS5ATP6表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ATP6转染HepG2细胞, 以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照, 制备转染后的细胞裂解液, 提取mRNA并逆转录为cDNA, 经Rsa I酶切后, 将实验组cDNA分成两组, 分别与两种不同的接头衔接, 再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR), 将产物与T/A载体连接, 构建cDNA消减文库, 并转染大肠杆菌进行文库扩增, 随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.

结果: 成功构建人NS5ATP6反式激活基因差异表达的cDNA消减文库. 文库扩增后得到33个阳性克隆, 进行菌落PCR分析, 均得到200-2 000 bp插入片段. 对插入片段测序, 并通过生物信息学分析获得其全长基因序列, 结果共获得26种编码基因, 包括24种已知基因和2种未知基因.

结论: 筛选到的cDNA全长序列, 包括一些与细胞生长调节、信号转导、肿瘤免疫发生及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因, 推测了NS5ATP6可能存在的调控机制的线索, 尚需进一步的实验证明.

Keywords: N/A