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中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1基因的克隆与表达
刘双虎, 谭德明, 侯珏, 胡国龄, 中南大学湘雅医院传染病科 湖南省长沙市 410008
刘双虎, 男, 1963-02-28, 湖南省攸县人, 汉族, 1986年中山医科大学本科毕业, 1995年湖南医科大学博士毕业, 副教授. 主要从事传染病的临床与基础研究, 主要研究方向为病毒性肝炎.
基金项目: 卫生部科研基金课题 , No. 98-1-120.
通讯作者: 刘双虎, 410008, 湖南省长沙市湘雅路141号, 中南大学湘雅医院传染病科. liushuanghu@hotmail.com
电话: 0731-4327221 传真: 0731-4327332
收稿日期: 2002-11-19
修回日期: 2002-11-30
接受日期: 2002-12-02
在线出版日期: 2003-08-15
修回日期: 2002-11-30
接受日期: 2002-12-02
在线出版日期: 2003-08-15
Abstract
目的
克隆和表达中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1; TIMP-1)基因, 获得具有抗原性的人TIMP-1蛋白.
方法
用RT-nest-PCR扩增TIMP-1编码区基因片段, 用基因重组技术构建含该片段的重组质粒并进行序列分析. 在大肠杆菌E.coli中表达融合蛋白MBP-TIMP-1, 用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析鉴定, 并用亲和层析试剂盒纯化融合蛋白MBP-TIMP-1.
结果
经核苷酸序列分析表明, 本研究克隆的中国人TIMP-1为624bp, 与报道的国外TIMP-1基因序列同源.经SDS-PAGE和Western blot表明, 表达的融合蛋白MBP-TIMP-1分子质量为66 Ku, 具有TIMP-1的抗原性, 并可进行亲和层析纯化.
结论
克隆了中国人TIMP-1基因, 表达和纯化了具有免疫原性的融合蛋白MBP-TIMP-1, 他将对肝纤维化的诊断有一定作用.
Keywords: N/A