病毒性肝炎
Copyright ©The Author(s) 2003. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2003-08-15; 11(8): 1126-1130
Published online 2003-08-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i8.1126
乙型肝炎病毒X蛋白与去唾液酸糖蛋白受体2突变体相互作用的研究
陆荫英, 陈天艳, 成军, 梁耀东, 王琳, 刘妍, 张健, 邵清, 李克, 张玲霞
陆荫英, 陈天艳, 成军, 梁耀东, 王琳, 刘妍, 张健, 邵清, 李克, 张玲霞, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
陆荫英, 女, 1973-08-27生, 贵州省贵阳市人, 汉族. 博士, 2003年军医进修学院毕业, 主治医师. 主要从事肝病的基础及临床工作.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689, 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063, 军队回国留学人员启动基金项目, No.98H038, 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138, 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-03-08
修回日期: 2003-03-20
接受日期: 2003-04-16
在线出版日期: 2003-08-15
Abstract
目的

筛选并克隆鉴定人肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)相互作用蛋白的基因, 明确HBxAg在HBV感染及致癌过程中的具体作用.

方法

用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBxAg基因, 连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒, 转化酵母细胞AH109并在其内表达, 然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合, 在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落, PCR从中扩增出阳性目的片段并测序, 进行生物信息学分析. 根据GenBank中的序列信息设计引物, 从HepG2细胞的mRNA中逆转录出去唾液酸蛋白受体2(ASGPR2)突变体的完整序列, 克隆到另一酵母表达载体pGADT7中, 体外免疫共沉淀再次证明HBxAg与ASGPR2突变体的结合作用.

结果

成功克隆出HBxAg基因并在酵母细胞中表达, 配合后选出既能在四缺( SD/-Trp-Leu-His-Ade)培养基又能分解X-α-半乳糖(X-α-gal)变成蓝色的真阳性菌落41个, 其中有一个是ASGPR2的新突变体. HepG2细胞的mRNA中能逆转录出ASGPR2的全基因序列, 体外免疫共沉淀结果证实该突变体与HBxAg在体外也有结合作用.

结论

成功克隆出HBxAg的肝细胞结合蛋白, 发现一新的ASGPR2突变体, 并证实HBxAg与ASGPR2突变体在体外及酵母细胞内均有结合作用.

Keywords: N/A