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乙型肝炎病毒前-S2蛋白结合蛋白基因S2-29的克隆化研究
陆荫英, 陈天艳, 成军, 梁耀东, 王琳, 刘妍, 李克, 张健, 邵清, 张玲霞, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
陆荫英, 女, 1973-08-27生, 贵州省贵阳市人, 汉族. 博士, 2003年军医进修学院毕业, 主治医师. 主要从事肝病的基础及临床工作.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No. C30070689, 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063, 军队回国留学人员启动基金项目, No.98H038, 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138, 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-03-08
修回日期: 2003-03-20
接受日期: 2003-04-16
在线出版日期: 2003-08-15
修回日期: 2003-03-20
接受日期: 2003-04-16
在线出版日期: 2003-08-15
Abstract
目的
筛选人肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白(Pre-S2)相互作用的蛋白, 探寻HBV致病机制.
方法
用多聚酶链反应 (PCR)技术扩增HBV前-S2基因, 连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒, 转化酵母细胞AH109并在其内表达, 然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合, 用营养缺陷型培养基及蓝白斑双重筛选阳性菌落, 提取酵母质粒转化大肠杆菌并测序, 进行生物信息学分析. 逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法从HepG2细胞的mRNA中扩增出完整的新基因S2-29, 连入另一酵母表达载体pGADT7, 并用免疫共沉淀方法再次证实二者间的相互作用.
结果
成功克隆出HBV前-S2基因并在酵母细胞中表达, 配合后筛选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-His-Ade)培养基又能在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落26个, 其中有1个未知基因S2-29, 该基因能在HepG2细胞中表达, 免疫共沉淀方法证实二者在体外也有结合作用.
结论
成功克隆出与乙型肝炎病毒前-S2蛋白相结合的新基因, 为进一步研究HBV前-S2的作用提供了新线索.
Keywords: N/A