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世界华人消化杂志. 2003-10-15; 11(10): 1480-1484
Published online 2003-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i10.1480
Published online 2003-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i10.1480
人幽门螺杆菌热休克蛋白A编码基因的克隆、表达及抗原性研究
姜政, 蒲丹, 陶小红, 王丕龙, 重庆医科大学第一附属医院消化科重庆市 400016
姜政, 男, 1965-06-06, 四川武胜人, 汉族, 1989年重庆医科大学本科毕业, 1994年重庆医科大学硕士研究生毕业, 现攻读2000级博士研究生, 副教授, 主要从事胃肠疾病的研究.
黄爱龙, 重庆医科大学肝炎研究所 重庆市 400010
通讯作者: 姜政, 400016, 重庆市渝中区医学院路1号, 重庆医科大学第一附属医院消化科. Jianggooddoctor@mailchina.com
电话: 023-68891218
收稿日期: 2002-11-29
修回日期: 2002-12-20
接受日期: 2002-12-27
在线出版日期: 2003-10-15
修回日期: 2002-12-20
接受日期: 2002-12-27
在线出版日期: 2003-10-15
Abstract
目的
构建含人幽门螺杆菌(H pylori)热休克蛋白A编码基因的重组载体、进行核甘酸序列分析, 并在E. coli BL21中表达, 研究其抗原性, 为疫苗的开发奠定基础.
方法
利用分子克隆技术从H pylori DNA染色体中, 扩增热休克蛋白A编码基因片段; 将目的基因与载体pET32a(+)同时经kpnI、BamH I 双酶切、纯化、连接后, 转化含有目的基因的重组载体; 以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21(DE30)并表达; 表达产物经纯化后, 用Western blot法检测其抗原性.
结果
经酶切、测序分析表明, 插入的基因片段为H pylori热休克蛋白A编码基因, 与GenBank报道的相比较, 有1.6%的碱基(bp)发生变异, 1.6%的氨基酸残基改变. 经SDS-PAGE分析发现, 融合基因表达的蛋白Mr为33×103, 其中pET32a(+)表达的蛋白Mr约为20×103, 可溶性表达产物占全菌总蛋白的18.96%. 重组蛋白经Ni+-NTA琼脂糖树脂纯化后, 其纯度达95%以上. 用Western blot方法检测显示, 该重组蛋白可被H pylori阳性患者的血清所识别, 具有良好的抗原性.
结论
成功地克隆并表达了H pylori热休克蛋白A码基因, 为H pylori蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的研究奠定了良好的基础.
Keywords: N/A