miR-346/DKK3信号轴在结肠癌中的细胞增殖的调控

图1 miR-346在结肠癌中的表达及其在细胞增殖中的作用. A: 与癌旁组织相比, 结肠癌组织中miR-346的表达水平较高, ^bP<0.01; B: 三种结肠癌细胞系中miR-346的表达显着高于正常结肠粘液上皮细胞内的表达, ^bP<0.01; C: 转染miR-346 mimics后, miR-346过表达实验组的细胞数多于对照组, ^bP<0.01; D: 过表达miR-346可显著促进细胞增殖; E: 过表达miR-346后, G1期细胞比例显着降低, S期和G2/M期细胞比例增加, 实验重复三次, 差异有统计学意义, P<0.05, E展示了其中一次的结果.

图2 DKK3可能是miR-346的潜在靶标. A: 与癌旁组织相比, 结肠癌中DKK3的表达显着降低, ^bP<0.01; B: 预测中DKK3和miR-346相互作用的具体序列(顶部). miR-346 mimics的转染抑制了野生型DKK3 3'-UTR荧光素酶活性, 而突变型DKK3 3'-UTR阻断了这种抑制(底部), ^bP<0.01; C: RT-PCR和western blot实验结果表明细胞转染miR-346 mimics后, DKK3表达显着下降.

图3 DKK3在结肠癌细胞增殖中的作用. A: 转染pcDNA-DKK3后, DKK3的mRNA水平显着增加, ^aP<0.05; B: 种板48 h后, DKK3过表达实验组的细胞数少于对照组, ^bP<0.01; C: DKK3的过表达可显着抑制细胞增殖; D: DKK3的过表达使G1期细胞比例显着增加, S期和G2/M期细胞比例减少; E: 转染siRNA-1和siRNA-2均可显着降低DKK3的mRNA水平, ^bP<0.01; F: 种板48 h后, 转染siRNA-1/siRNA-2干扰DKK3表达的实验组的细胞数比对照组多, ^bP<0.01; G: DKK3的表达下降可显着促进细胞增殖; H: DKK3的表达下降使G1期的细胞比例显着降低, 以及S期和G2/M期细胞比例增加, 实验重复三次, 差异有统计学意义, P<0.05, H展示了其中一次的结果.

图4 MiR-346通过下调DKK3表达来调节细胞增殖. A: 转染miR-346 mimics后, DKK3的mRNA水平显着增加, ^bP<0.01, 对照组与miR-346和DKK3过表达组之间DKK3的表达无显着差异; B: miR-346过表达的实验组的细胞数量多于对照组, ^bP<0.01, 对照组与miR-346和DKK3过表达组之间细胞数无显着差异; C: 过表达miR-346可显着促进细胞增殖. 对照组与miR-346和DKK3过表达组之间细胞增殖无显着差异; D: 过表达miR-346使G1期细胞比例显着降低, S期和G2/M期细胞比例增加. 对照组与miR-346和DKK3过表达组之间细胞周期无显着差异.