研究快报
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世界华人消化杂志. 2014-03-28; 22(9): 1266-1274
Published online 2014-03-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i9.1266
HIPK2调控COX-2及β-catenin表达对人结直肠癌细胞VEGF表达的影响
胡强, 周利红, 刘宣, 隋华, 付晓伶, 颜琳琳, 任建琳, 李琦
胡强, 上海市徐汇区大华医院普外科 上海市 200237
周利红, 刘宣, 隋华, 付晓伶, 颜琳琳, 李琦, 上海中医药大学附属曙光医院肿瘤科 上海市 201203
任建琳, 上海市中医医院肿瘤科 上海市 200071
胡强, 硕士, 副主任医师, 主要从事胃肠外科的临床与基础研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81303103, 81303106 ; 上海市科委基金资助项目, Nos. 13140902500, 13ZR1462200; 上海市教委创新基金资助项目, Nos. 12ZZ118, 12YZ058; 上海市卫生局基金资助项目, Nos. 2010161, 2011ZJ030, 20124048; 上海市徐汇区医学科研基金资助项目, No. SHXH201004.
作者贡献分布: 本课题由李琦设计; 研究过程由胡强、周利红、刘宣、隋华、付晓伶及颜琳琳共同完成; 研究所用新试剂与分析工具由胡强与李琦提供; 数据分析由任建琳与周利红共同完成; 本论文写作由胡强与周利红完成.
通讯作者: 李琦, 主任医师, 博士生导师, 201203, 上海市张衡路528号, 上海中医药大学附属曙光医院肿瘤科. lzwf@hotmail.com
电话: 021-20256533
收稿日期: 2013-12-04
修回日期: 2014-01-13
接受日期: 2014-01-24
在线出版日期: 2014-03-28
Abstract

目的: 研究同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinases 2, HIPK2)基因重组质粒对HCT-116细胞环氧合酶2(cyclooxygenase 2, COX-2)及β-catenin表达的影响, 探讨HIPK2基因对人结直肠癌细胞血管新生因子表达的调节作用.

方法: 采用脂质体将pEGFP-N3和pEGFP-N3-HIPK2质粒转染人结直肠癌细胞, 分为正常组、载体质粒组和HIPK2质粒组, ELISA法检测细胞培养液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达, Western blot检测β-catenin蛋白表达情况. 在上述3组细胞中同时转染含COX-2基因启动子质粒pGL3-basic-COX-2后, 双荧光素酶活性检测COX-2启动子的表达, Real-time PCR检测COX-2 mRNA的表达水平.

结果: HCT-116细胞中pEGFP-N3-HIPK2质粒组的荧光表达量与载体质粒pEGFP-N3组的表达量基本一致, 两组相比无明显差异. 转染pEGFP-N3-HIPK2质粒后, HCT-116细胞内VEGF的表达量由对照组的857.54 pg/mL±65.04 pg/mL降低至368.32 pg/mL±98.82 pg/mL, 两组相比具有统计学意义(P<0.05); COX-2启动子活性由空载体组的266.407×10-5±40.902×10-5下降至75.467×10-5±18.666×10-5, 两组相比具有统计学意义(P<0.05); COX-2 mRNA的相对表达量由空载体组的3.48×10-4±0.64×10-4下调至1.07×10-4±0.32×10-4, 两组相比具有统计学意义(P<0.05). 同时, Western blot结果显示, HIPK2可明显降低细胞β-catenin的蛋白表达, 上调细胞内p-β-catenin蛋白的表达量.

结论: pEGFP-N3-HIPK2可明显上调HCT-116细胞HIPK2的表达, 显著下调人结直肠癌细胞COX-2的转录表达及VEGF的表达水平, 其作用机制可能与其抑制细胞COX-2及β-catenin表达, 调节β-catenin-COX-2信号转导有关.

Keywords: 同源结构域相互作用蛋白激酶2; 血管内皮生长因子; 结直肠癌; 血管新生; 环氧合酶2

核心提示: 目前研究认为, 同源结构域相互作用的蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinases 2)基因是一种在大肠癌细胞中低表达的抑癌基因, 我们研究发现其抑制结直肠癌细胞血管内皮生长因子表达可能与其下调细胞内环氧合酶2(cyclooxygenase 2)及β-catenin表达有关, 其详细的作用机制尚有待于进一步的研究及探讨.