基础研究
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世界华人消化杂志. 2013-01-18; 21(2): 122-129
Published online 2013-01-18. doi: 10.11569/wcjd.v21.i2.122
胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用
唐余燕, 余永胜, 卓萌, 臧国庆, 汤正好, 陈小华
唐余燕, 余永胜, 卓萌, 臧国庆, 汤正好, 陈小华, 上海交通大学附属第六人民医院感染病科 上海市 200233
唐余燕, 硕士, 主要从事病毒性肝炎发病机制及免疫治疗方面的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 31000414.
作者贡献分布: 此课题由陈小华设计; 研究过程由唐余燕与卓萌完成; 数据分析由汤正好、余永胜及臧国庆完成; 本论文写作由唐余燕与陈小华完成.
通讯作者: 陈小华, 200233, 上海市宜山路600号, 上海交通大学附属上海市第六人民医院感染病科. chenxiaohua2000@163.com
电话: 021-64369181-8673
收稿日期: 2012-11-30
修回日期: 2012-12-26
接受日期: 2013-01-05
在线出版日期: 2013-01-18
Abstract

目的: 观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide, CTP)-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell, DC)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用.

方法: 体外分离、培养HBV转基因小鼠及近交系C57BL/6小鼠髓源性DC, 加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白介素(interleukin, IL)-4培养5 d, 再加入实验组10 μg/mL CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组10 μg/mL CTP-HBcAg18-27、10 μg/mL HBcAg18-27-Tapasin及空白组RPMI 1640完全培养液. 流式细胞术测定DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达, ELISA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平, 细胞计数试剂盒(CCK-8)检测T淋巴细胞增殖反应, 流式细胞仪检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子.

结果: 体外成功诱导小鼠髓源性DC; CTP-HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达; 并且CTP-HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平及诱导DC增殖T淋巴细胞增殖能力明显高于对照组及空白组[IL-12p70转基因小鼠(F = 205.85, P = 0.000); C57BL/6小鼠(F = 406.20, P = 0.000)]; 流式细胞仪检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平也高于对照组[转基因小鼠(F = 155.45, P = 0.000); C57BL/6小鼠(F = 392.90, P = 0.000)], 同时HBV转基因小鼠DC表面分子及在T淋巴细胞增殖中的作用要比C57BL/6小鼠低.

结论: 分子伴侣Tapasin修饰胞内化抗原肽能促进HBV转基因小鼠髓源性DC的分化、成熟, 并能增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力及诱导CTL的产生.

Keywords: 胞质转导肽; HBcAg18-27; Tapasin; 树突细胞; T淋巴细胞