Published online 2010-11-18. doi: 10.11569/wcjd.v18.i32.3452
修回日期: 2010-09-07
接受日期: 2010-09-13
在线出版日期: 2010-11-18
目的: 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肝细胞株LO2细胞线粒体融合蛋白基因2(Mfn2)基因表达的调节作用以及对线粒体形态和细胞三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)生成的影响.
方法: 利用脂质体Lipofectamine 2000将Mfn2基因荧光表达载体(pEGFP-Mfn2)转染肝细胞株LO2细胞, 以终浓度为500 kU/L的TNF-α作用LO2细胞株和稳定高表达Mfn2的LO2细胞株12 h, 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各组细胞Mfn2 mRNA转录水平以及蛋白的表达水平, 线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)染色观察线粒体形态变化, 荧光素酶ADP/ATP发光法检测各组细胞ATP含量, 荧光探针DCFH-DA测定细胞ROS生成水平.
结果: 经TNF-α处理后LO2细胞中Mfn2基因的mRNA及蛋白表达水平显著低于空白对照组(0.279±0.026 vs 0.742±0.018; 0.196±0.024 vs 0.580±0.011, P<0.05); 对照组及转染Mfn2基因组肝细胞线粒体形态主要为丝状网络或长柱状, TNF-α处理后未转染肝细胞线粒体断裂成点状碎片, 但转染组线粒体形态则无明显改变; TNF-α处理后LO2细胞内ATP浓度显著下降(2.00 µmol/g±0.15 µmol/g vs 5.81 µmol/g±0.31 µmol/g, P<0.05), 而ROS生成水平较空白对照组显著升高(FI: 80.68±4.02 vs 65.44±3.47, P<0.05), 但转染组细胞内ATP下降水平要显著低于未转染组, 而未转染组ROS升高程度则显著高于转染组(P<0.05).
结论: TNF-α通过抑制肝细胞Mfn2的表达诱导线粒体形态改变及线粒体功能障碍.