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世界华人消化杂志. 2008-04-18; 16(11): 1144-1150
Published online 2008-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i11.1144
Published online 2008-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i11.1144
抗体库优化策略对特异性抗肝癌单链抗体的人源化
叶刚, 杨冬华, 汤绍辉, 黄卫, 丁世华, 罗静兰, 暨南大学附属第一医院内科 广东省广州市 510632
叶刚, 2007年暨南大学博士, 主治医师, 主要从事单链抗体的研究.
基金项目: 暨南大学博士创新基金资助项目暨南大学附属第一临床医学院科研培育专项基金资助项目; 广东省科技计划基金资助项目, No. 2006B19901014; 广东省名医工程研究基金资助项目, No. 2004-199; 广州市科委领域专项创新药物基金资助项目, No. 2004Z3-E4l21.
作者贡献分布: 叶刚与杨冬华对此文所作贡献均等; 此课题由杨冬华, 叶刚及汤绍辉设计; 研究过程由叶刚, 汤绍辉及丁世华操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由汤绍辉提供; 数据分析由黄卫及罗静兰完成; 本论文写作由叶刚完成.
通讯作者: 杨冬华, 510630, 广东省广州市, 暨南大学附属第一医院消化内科. thdyang@163.com
电话: 020-38688622
收稿日期: 2007-09-24
修回日期: 2008-03-05
接受日期: 2008-04-11
在线出版日期: 2008-04-18
修回日期: 2008-03-05
接受日期: 2008-04-11
在线出版日期: 2008-04-18
Abstract
目的: 对特异性抗肝癌单链抗体(single chain variable fragment, scFv)DM同步进行人源化和优化, 以获得亲和力高和免疫原性低的人源化抗肝癌单链抗体.
方法: 通过分子结构和序列分析, 确定对抗原结合位点的构象有重要影响的骨架区(FR)残基, 把难以判断回复突变残基的人、鼠源副本同时编入人源化抗体序列中; 通过重叠延伸PCR技术合成人源化抗体全基因, 利用噬菌体展示技术构建人源化组合抗体库; 通过肝癌细胞筛选阳性克隆, ELISA方法测定各个克隆抗原结合活性; 用硫氰酸盐洗脱法测定并比较亲本抗体和人源化scFv的相对亲和力.
结果: 成功构建人源化组合抗体库, 实际库容4.77×105, 包含由25不同重链和22不同轻链组成的128种人源化DM; 经过筛淘及ELISA鉴定, 获得HDM1、HDM2和HDM3 3个阳性克隆, 相对亲和力指数分别为HDM1 1.6 mol/L、HDM2 1.2 mol/L和HDM3 2.2 mol/L.
结论: 抗体库优化法是一个高效、简便的人源化方法; 获得的3株阳性克隆HDM1、HDM2、HDM3与亲本抗体DM同样具有良好的抗原结合特异性和较高的亲和力.
Keywords: 人源化; 单链抗体; 组合抗体库; 肝癌; 重叠延伸PCR; 硫氰酸盐洗脱法; 酶联免疫吸附试验; 噬菌体展示技术