Published online 2007-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i14.1583
修回日期: 2007-01-28
接受日期: 2007-02-08
在线出版日期: 2007-05-18
目的: 研究肝脏缝隙连接细胞间通讯(GJIC)对大鼠体内肝卵圆细胞(HOC)增殖的影响.
方法: 健康♂Wistar大鼠, 随机分成对照组(n = 6)、模型组、苯巴比妥(Phenobarbital, PB)组. 模型组大鼠按每天20 mg/kg剂量灌喂2-AFF, 连续4 d, 第5天不灌喂行2/3肝切除, 术后次日按每天20 mg/kg剂量继续灌喂5 d (2-AFF/PH); PB组予以0.8 g/L PB饮水7 d, 第8天按模型组处理, 0.8 g/L PB饮水持续至实验结束. 模型组、PB组在术后4 h, 4, 8, 12和16 d随机取6只大鼠检测. 采用组织病理技术观察肝组织的形态学变化; 免疫组化和细胞形态学方法计数HOC; 切开标记/染料示踪技术(incision loading/dye transfer, IL/DT)技术确定GJIC; 免疫组化及RT-PCR技术检测CX32蛋白及mRNA表达; 免疫组化、Western blot及RT-PCR技术分析CX43蛋白及mRNA水平.
结果: 对照组及模型组和PB组4 h未见HOC增殖. 模型组4 d汇管区有HOC增殖反应, 8 d HOC增殖达峰值, 12 d HOC从汇管区向肝实质内浸润, 16 d HOC增殖较12 d减少. 与模型组比较PB组4-16 d各时点HOC明显增加(P<0.01); IL/DT显示各时点模型组大鼠肝脏GJIC均低于对照组(P<0.01), 与模型组比较PB组各时点GJIC进一步降低(P<0.01); 模型组、PB组各时点CX32的表达低于对照组(P<0.05), 与模型组比较PB组CX32表达在4 h, 12, 16 d时点减少(P<0.05), 在4, 8 d时点表达增多(P<0.05; 模型组4 h-16 d时点CX32 mRNA水平分别为对照组的0.82±0.13, 0.33±0.11, 0.51±0.13, 0.68±0.14, 1.12±0.18倍, 与模型组比较PB组4 h时点无显著差异(P>0.05), 4-16 d时点明显升高(P<0.05). 模型组4 h-16 d各时点CX43蛋白表达分别为对照组的1.14±0.17, 3.87±0.35, 5.28±0.48, 2.96±0.33, 2.12±0.19倍, 与模型组比较PB组CX43蛋白4 h上调(P>0.05), 4-16 d明显减少(P<0.05). 模型组4 h-16 d各时点CX43 mRNA水平分别为对照组的1.09±0.16, 2.82±0.23, 5.46±0.58, 3.34±0.64, 0.91±0.11倍. 与模型组比较PB组各时点CX43 mRNA表达上调(P<0.05).
结论: 改变大鼠2-AAF/PH模型肝脏CX32、CX43的时空表达模式, 降低肝脏肝细胞及HOC与其偶联细胞的GJIC, 可解除HOC生长抑制, 促进HOC的增殖.