研究快报
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世界华人消化杂志. 2005-02-15; 13(4): 543-545
Published online 2005-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i4.543
ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtN236T变异
闫杰, 冯鑫, 王磊, 宋淑静, 谢雯, 欧蔚妮, 李蕴铷
闫杰, 谢雯, 欧蔚妮, 李蕴铷, 北京地坛医院五病区 北京市 100011
冯鑫, 宋淑静, 北京地坛医院病毒研究室 北京市 100011
王磊, 山东大学医学院济南市传染病医院四病区 山东省济南市 250021
基金项目: 首都医学发展科研基金, No. 2002-3046; 山东省卫生厅计划项目, No. 2001CA1CAA11.
通讯作者: 闫杰, 100011, 北京市安外大街地坛公园13号, 北京地坛医院五病区. jieyan@bbn.cn
电话: 010-64211031-2330 传真: 010-64281540
收稿日期: 2004-11-23
修回日期: 2004-11-26
接受日期: 2004-11-29
在线出版日期: 2005-02-15
Abstract

目的: 建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法.

方法: 根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物, 使野生株(rt236N)PCR产物中含有DraI酶切位点(5'TTTAAA3'), 而变异株(rt236T)无此限制性酶切位点. 同时PCR扩增2份已行HBV RT区基因测序证实未出现rtN236T变异的慢性乙型肝炎患者血清及自行构建的对照质粒, 扩增产物经DraI酶切, 30 g/L琼脂糖凝胶电泳后, 进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析.

结果: 所建立的ntPCR-RFLP方法灵敏度高, 可以检测到106copies/L的HBV DNA; 特异性强, 其RFLP分析结果与DNA

测序结果一致.

结论: ntPCR-RFLP方法灵敏、特异、简便、实用, 适用于ADV耐药变异的临床监测工作.

Keywords: N/A