胃癌组织中肿瘤相关基因甲基化及其表达与叶酸和代谢酶MTHFR基因多态性的关系

表1 定量PCR引物及探针序列

基因	正义引物(5'-3')	反义引物(5'-3')	探针	基因登录号
β-actin	CTG GCA CCC AGC ACA ATG	GGA CAG CGA GGC CAG GAT	ATC ATT GCT CCT CCT GAG	BC016045
p16INK4A	CAT AGA TGC CGC GGA AGG T	CAG AGC CTC TCT GGT TCT TTC AA	CCT CAG ACA TCC CCG	NM_058197
p21WAF1	CTG GAG ACT CTC AGG GTC GAA	GGA TTA GGG CTT CCT CTT GGA	ACG GCG GCA GAC CAG CAT GA	NM_078467
c-myc	ACA CCG CCC ACC ACC AG	CCA CAG AAA CAA CAT CGA TTT CTT	AGC GAC TCT GAG GAG G	V00568
hMLH1	GGC CAG CTA ATG CTA TCA AAG AG	CTT TAA CAA TCA CTT GAA TAC TTG TGG A	ATT GAG AAC TGT TTA GAT GCA	U07418
hMSH2	ATC CAA GGA GAA TGA TTG GTA TTT G	CAA AGA GAA TGT CTT CAA ACT GAG AGA	CAT ATA AGG CTT CTC CTG GC	U04045

表2 MSP引物序列及PCR扩增条件

基因	正义引物(5'-3')	反义引物(5'-3')	反应条件	基因登录号
p16INK4A (M)	TTA TTA GAG GGT	GAC CCC GAA CCG	95℃ 5 min; 95℃ 30 s, 65℃ 30 s,	X94154
	GGG GCG GAT CGC	CGA CCG TAA	72℃ 30 s, 40 cycles; 72℃ 5 min
p16INK4A (U)	GGG GGA GAT TTA	CCC TCC TCT TTC	95℃ 5 min; 95℃ 30 s, 58℃ 30 s,	X94154
	ATT TGG	TTC CTC	72℃ 30 s, 40 cycles; 72℃ 5 min
p21WAF1 (M)	TGT AGT ACG CGA	TCA ACT AAC GCA	95℃ 5 min; 95℃ 40 s, 60℃ 40 s,	NM_007592
	GGT TTC G	ACT CAA CG	72℃ 40 s, 40 cycles; 72℃ 5 min
p21WAF1 (U)	TTT TTG TAG TAT	AAC ACA ACT CAA	95℃ 5 min; 95℃ 40 s, 56℃ 40 s,	NM_007592
	GTG AGG TTT TGG	CAC AAC CCT A	72℃ 40 s, 40 cycles; 72℃ 5 min
c-myc (M)	TAG AAT TGG ATC	CGA CCG AAA ATC	95℃ 5 min; 95℃ 1 min, 56℃ 2 min,	AF002859
(exon1-2)	GGG GTA AA	AAC GCG AAT	72℃ 3 min, 5 cycles; 95℃ 30 s,
			56℃ 30 s, 72℃ 1 min, 35 cycles;
			72℃ 5 min
c-myc (U)	TAG AAT TGG ATT	CCA ACC AAA AAT	95℃ 5 min; 95℃ 1 min, 56℃ 2 min,	AF002859
(exon1-2)	GGG GTA AA	CAA CAT GAA T	72℃ 3 min, 5 cycles; 95℃ 30 s,
			56℃ 30 s, 72℃ 1 min, 35 cycles;
			72℃ 5 min
hMLH1 (M)	ACG TAG ACG TTT	CCT CAT CGT AAC	95℃ 5 min; 95℃ 30 s, 60℃ 60 s,	AB017806
	TAT TAG GGT CGC	TAC CCG CG	72℃ 60 s, 40 cycles; 72℃ 5 min
hMLH1 (U)	TTT TGA TGT AGA TGT	ACC ACC TCA TCA	95℃ 5 min; 95℃ 30 s, 60℃ 60 s,	AB017806
	TTT ATT AGG GTT GT	TAA CTA CCC ACA	72℃ 60 s, 40 cycles; 72℃ 5 min
hMSH2 (M)	TCG TGG TCG GAC	CAA CGT CTC CTT	95℃ 5 min; 95℃ 30 s, 60℃ 60 s,	AB006445
	GTC GTT C	CGA CTA CAC CG	72℃ 60 s, 40 cycles; 72℃ 5 min
hMSH2 (U)	GGT TGT TGT GGT	CAA CTA CAA CAT CTC	95℃ 5 min; 95℃ 30 s, 60℃ 60 s,	AB006445
	TGG ATG TTG TTT	CTT CAA CTA CAC CA	72℃ 60 s, 40 cycles; 72℃ 5 min

表3 肿瘤相关基因在胃癌组织中的表达 n(%)

基因	组织	表达升高	无变化	表达降低	Nx
p16INK4A	癌旁	2(5.3)	22(57.9)	14(36.8)	0.78±0.82
	癌区	2(5.3)	13(34.2)	23(60.5)	0.70±0.93
p21WAF1	癌旁	3(7.9)	22(57.9)	13(34.2)	0.93±1.01
	癌区	2(5.3)	14(36.8)	22(57.9)	0.70±0.86a
hMLH1	癌旁	1(2.6)	20(52.6)	17(44.7)	0.66±0.92a
	癌区	2(5.3)	14(36.8)	22(57.9)	0.61±0.86a
hMSH2	癌旁	2(5.3)	20(52.6)	16(42.1)	0.82±1.22
	癌区	1(2.6)	17(44.7)	20(52.6)	0.68±0.85a
c-myc	癌旁	14(36.8)	21(55.3)	3(7.9)	2.76±3.44b
	癌区	19(50.0)	15(39.5)	4(10.5)	3.27±2.88b

^aP<0.05,

^bP<0.01.

表4 MTHFR多态性与肿瘤相关基因表达的关系 n(%)

基因	MTHFR	表达增强	无变化	表达减弱	Nx
p16INK4A	677CC	1	3	10(71.4)	0.63±1.05
	677CT	1	8	10(52.6)	0.7±0.88
	677TT		2	3(60.0)	0.85±0.96
	1298AA	1	9	16(61.5)	0.57±0.96
	1298AC	1	4	7(58.3)	0.81±1.15
p21WAF1	677CC	1	7	6(42.9)	1.06±1.06
	677CT	1	5	13(68.4)	0.47±0.69
	677TT		2	3(60.0)	0.55±0.55
	1298AA	2	10	14(53.9)	0.75±0.85
	1298AC		4	8(66.7)	0.58±0.85
c-myc	677CC	6(42.9)	7	1	2.26±2.17a
	677CT	11(57.9)	6	2	4.32±3.25
	677TT	2(40.0)	2	1	2.15±1.8
	1298AA	15(57.9)	8	3	3.84±3.17
	1298AC	4(33.3)	7	1	2.06±1.64
hMLH1	677CC		3	11(78.6)	0.46±0.67
	677CT	1	8	10(52.6)	0.57±0.82
	677TT	1	3	1(25.0)	1.3±1.28
	1298AA	2	10	14(53.9)	0.72±0.96
	1298AC		4	8(66.8)	0.39±0.55
hMSH2	677CC		5	9(64.3)	0.31±0.32
	677CT	1	10	8(42.1)	0.88±0.97a
	677TT		3	2(40.0)	0.94±1.12
	1298AA	1	13	12(46.2)	0.8±0.98
	1298AC		5	7(58.3)	0.4±0.42

^aP<0.05.

表5 叶酸和肿瘤相关基因表达与甲基化的关系

基因	甲基化	降低	增高和无变化	叶酸浓度(μg/L)
p16INK4A	高	9	0	2.16±1.11
	非	14	15b	4.11±1.96b
p21WAF1	高	7	1	3.09±1.39
	非	15	15	3.77±2.11
hMLH1	高	8	0	3.06±1.62
	非	14	16a	3.81±2.04
hMSH2	高	5	0	2.77±0.84
	非	15	18a	3.78±2.06
c-myc	低	0	6	2.25±1.23
	高	19	13a	3.91±2.01

^aP<0.05,

^bP<0.01.