水蓑衣提取物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

摘要

目的: 探讨水蓑衣提取物对肝脏的保护作用.

方法: 40只雄性昆明种小鼠, 随机分为对照组、CCl₄损伤对照组、低剂量水蓑衣(45 g/kg)组、高剂量水蓑衣(90 g/kg)组和联苯双酯(150 mg/kg)组. 除正常对照组外, 其余动物均采用ip CCl₄复制急性肝损伤小鼠模型, CCl₄注射后16 h处死动物, 测定各组小鼠血清ALT、AST的活性以及检查肝组织的病理改变, 观察不同剂量水蓑衣对肝脏的保护作用.

结果: 与正常对照组相比, CCl₄损伤对照组动物血清ALT和AST活性显著升高(P<0.01). 肝脏出现轻度、中度和重度坏死及变性, 低剂量水蓑衣组、高剂量水蓑衣组血清ALT和AST明显低于CCl₄损伤对照组(ALT: 1 485±755, 1 211±528 vs 3 179±106; AST: 2 045±293, 2 052±386 vs 2 583±116, P<0.01), 与联苯双酯组相比无显著差异. 水蓑衣能明显减轻CCl₄引起的肝脏结构损害, 高剂量水蓑衣的作用尤为突出, 其作用优于联苯双酯.

结论: 水蓑衣呈剂量依赖性地减轻CCl₄引起的肝损害, 其作用优于联苯双酯.

关键词: 四氯化碳; 急性肝损伤; 水蓑衣; 提取物; 小鼠

Protective effect of extraction from Hygrophila salicifolia on mice acute hepatic injury

Da-Ming Feng, Shuang Wang, Ya-Lin Tang, Yong-Zong Yang, Gang-Zhi Zhu, Di-Zhong Yan

Da-Ming Feng, Shuang Wang, Ya-Lin Tang, Yong-Zong Yang, Gang-Zhi Zhu, Di-Zhong Yan, Department of Pathophysiology and Center of Molecular Biology Nanhua University, Hengyang 421001, Hunan Province, China

Correspondence to: Di-Zhong Yan, Center of Molecular Biology Nanhua University, Hengyang 421001, Hunan Province, China. yzyanghy@163.com

Received: January 17, 2005
Revised: January 28, 2005
Accepted: February 2, 2005
Published online: May 1, 2005

Abstract

AIM: To investigate the hepatoprotective effect of the extraction from Hygrophila salicifolia.

METHODS: Forty male Kunming mice were divided equally into the normal control group, the CCl₄ injury group, the low-dose (45 g/kg) Hygrophila salicifolia group, the high-dose (90 g/kg) Hygrophila salicifolia group, and the Bifendate (150 mg/kg) group. All the mice except for those in the normal control group had acute hepatic injury induced by carbon tetrachloride (CCl₄) 10 mL/kg injected intraperitoneally. The animals were killed 16 h after CCl₄ administration. The activities of serum ALT and AST, as well as the pathological changes of the liver were determined in all groups.

RESULTS: In comparison to the normal control group, the activities of serum ALT and AST in mice with CCl₄ injury were increased significantly (P<0.01). The liver histology showed mild to serious necrosis and degeneration. Serum ALT and AST in both Hygrophila salicifolia groups were significantly lower than those in CCl₄ injury group(ALT: 1 485±755, 1 211±528, 3 179±106; AST: 2 045±293, 2 052±386, 2 583±116, in low-dose, high-dose Hygrophila salicifolia, and CCl₄ injury group, respectively, all P<0.01). The liver necrosis and degeneration induced by CCl₄ were also improved significantly after Hygrophila salicifolia administration. The effect of high-dose Hygrophila salicifolia was superior to that of Bifendate.

CONCLUSION: The extraction from Hygrophila salicifolia can protect the liver from damage induced by CCl₄ in a dose-dependent manner. The effect of high-dose Hygrophila salicifolia is better than that of Bifendate.

Key Words: CCl₄; Acute hepatic injury; Hygrophila salicifolia; Extraction; Mice

0 引言

水蓑衣(hygrophila salicifolia)为爵床科水蓑衣属植物, 性甘、微苦, 凉, 常用于咽喉炎, 乳腺炎, 吐血, 衄血和百日咳的治疗[1]. 我们在临床实践中观察到水蓑衣提取物治疗病毒性肝炎有较好疗效, 为进一步证实水蓑衣对肝脏的保护作用, 探讨水蓑衣防治病毒性肝炎的作用机制, 为临床治疗提供实验依据, 我们从肝功能和病理形态学两个方面观察水蓑衣对CCl₄所致小鼠急性肝损伤的防治作用.

1 材料和方法

1.1 材料

水蓑衣提取物由南华大学附属南华医院药剂科制备. 流程如下: 晾干草药水蓑衣1 600 g切片, 浸泡于700 mL/L乙醇10 L中, 在60-70℃条件下循环蒸馏2 h, 反复2次后收集蒸馏液, 离心30 min(2 000 r/min), 过滤, 最后收集药液2 000 mL. 实验前将175 mL药液再次浓缩成15 mL, 即每毫升药液中含生药9 g, 4℃保存备用. 联苯双酯, 浙江万邦药业有限公司生产, 蒸馏水溶解配制成15 g/L的溶液, 供灌胃用. 四氯化碳(CCl₄), 分析纯, 上海长江化工厂生产, 稀释成1.5 mL/L的橄榄油乳剂, 供ip用. 血清ALT及AST测定试剂盒(赖氏法)均购自上海荣盛生物技术有限公司.

1.2 方法

雄性昆明种小鼠40只, 体质量18-30 g, 由南岳制药厂提供. 随机分为5组, 每组8只; 在ip CCl₄前24, 12, 1 h, 正常对照组及CCl₄损伤对照组均每次以10 mL/kg蒸馏水灌胃; 低剂量水蓑衣组和高剂量水蓑衣组分别按5 mL/kg、10 mL/kg水蓑衣提取物灌胃; 联苯双酯组按10 mL/kg联苯双酯灌胃. 除正常对照组外, 其余4组末次灌胃后1 h用1.5 mL/L CCl4橄榄油乳剂10 mL/kg给小鼠腹腔注射. 禁食过夜, 16 h后摘眼球取血, 分离血清, 用诊断试剂盒测定血清ALT, AST活性(均严格按照试剂盒说明书操作), 并剖腹切取肝脏右叶, 用40 g/L的甲醛溶液固定, 常规石蜡包埋切片, HE染色, 光镜观察肝脏组织病理学变化.

统计学处理 运用SPSS8.0统计软件, 计量资料用均数±标准差(mean±SD)表示, 两组比较用t检验, P<0.05表示差异有统计学显著性.

2 结果

2.1 水蓑衣对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清ALT及AST活性的影响

给小鼠ip 1.5 mL/L CCl₄橄榄油乳剂后, 小鼠血清ALT活性由1 041±97 nkat/L上升至3 179±106 nkat/L(P<0.01), 血清AST活性由1 923±300 nkat/L上升至2 583±116 nkat/L(P<0.01), 显示CCl₄引起小鼠急性肝损伤. 与CCl₄对照组比, 低剂量水蓑衣组与高剂量水蓑衣组的血清ALT和AST活性均显著降低(ALT: 1 485±755, 1 211±528 vs 3 179±106; AST: 2 045±293, 2 052±386 vs 2 583±116, P<0.01), 与联苯双酯组无明显差异. 说明水蓑衣对CCl₄所致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用(表1).

表1 水蓑衣对CCl₄诱导的急性肝损伤小鼠血清ALT及AST活性的影响(mean±SD, n = 8).

分组	血清ALT(nkat/L)	血清AST(nkat/L)
正常对照	1 041±97b	1 923±300b
CCl4损伤对照	3 179±106	2 583±116
低剂量水蓑衣	1 485±755b	2 045±293b
高剂量水蓑衣	1 211±528b	2 052±386b
联苯双酯	1 182±567b	2 087±462b

^bP<0.01 vs CCl₄对照组.

2.2 肝组织学检查

肉眼可见CCl4对照组小鼠的肝脏肿大, 淤血明显, 肝脏表面有点状出血, 低剂量水蓑衣组与高剂量水蓑衣组小鼠的肝脏均为轻度肿大、淤血, 无点状出血. CCl₄引起的肝组织损伤主要表现为肝细胞坏死和肝细胞变性. 肝细胞坏死表现为碎片状坏死、灶性坏死并伴有中性粒细胞和单核/巨噬细胞浸润, 碎片状坏死主要分布在门管区; 肝细胞变性主要表现为不同程度的水变性和嗜酸性变(图1A-C). 动物给予联苯双酯后再给予CCl₄, 其肝脏仍有亚大块坏死, 较多灶性坏死和嗜酸性变, 但较CCl₄组为轻(图1H-I).预先给予水蓑衣能明显减轻CCl₄引起的肝细胞变性及坏死, 突出表现为肝细胞重度坏死和变性的例数明显减少, 其中高剂量水蓑衣的作用尤为显著(P<0.05), 且其作用明显优于阳性对照的联苯双酯(表2, 图1D-G). 说明水蓑衣对CCl₄引起的急性肝损伤有较好的保护作用.

图1 肝组织学HE×40. A: 正常; B, C: CCl₄损伤; D, E: 低剂量水蓑衣; F, G: 高剂量水蓑衣; H, I: 联苯双酯.

表2 水蓑衣对CCl₄诱导的小鼠肝病理变化的影响(n = 8).

分组	肝细胞坏死				肝细胞变性
	-	+	++	+++	-	+	++	+++
正常对照	8	0	0	0	8	0	0	0
CCl4损伤对照	0	1	2	5	0	1	2	5
水蓑衣低剂量	0	2	4	2	0	2	4	2
水蓑衣高剂量	1	3	4	0a	0	3	5	0a
联苯双酯	0	2	3	3	0	2	3	3

+: 坏死<1/4或轻度肝细胞变性, ++: +与+++之间, +++坏死>1/3或重度肝细胞变性.

^aP<0.05 vs CCl₄组.

3 讨论

CCl₄肝损伤动物模型是研究护肝药物最常用的病理模型之一. CCl₄引起肝损伤的机制为CCl₄在肝微粒体细胞色素P-450激活下生成三氯甲基自由基, 这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合, 也可攻击膜不饱和脂质, 引起脂质过氧化, 使肝细胞损伤, 转氨酶从受损的肝细胞内溢出, 使血清中转氨酶活性升高[2-5]. 小鼠ipCCl4后ALT, AST值明显高于正常对照组, 病理学检查证实有肝细胞碎片状坏死、亚大块坏死、灶性坏死伴有中性粒细胞和单核/巨噬细胞浸润, 并出现不同程度的肝细胞变性, 这些与文献[4,7]报道的大致相同. 已知联苯双酯对多种肝损伤动物模型及乙肝患者的肝脏有保护作用[5-6], 我们以联苯双酯作为CCl₄中毒护肝的阳性对照. 研究结果表明, 联苯双酯组血清ALT和AST活性显著低于CCl₄组, 但防护肝脏结构受损的作用不如水蓑衣显著, 肝脏仍有亚大块坏死, 较多灶性坏死及嗜酸性变. 给予水蓑衣后, 各剂量组ALT、AST值较CCl₄对照组有明显降低, 差异有显著性, 并且明显减轻小鼠肝脏的病理损伤, 其中高剂量水蓑衣较低剂量水蓑衣的作用更为显著, 显示出一定的剂量依赖性, 表明水蓑衣能够减轻CCl₄对肝细胞的急性损害, 对肝脏具有保护作用. 而且其减轻CCl₄所致肝脏结构损害方面优于联苯双酯. 水蓑衣抗肝损伤的作用是否与抗脂质过氧化有联系, 药物是促进毒性代谢产物的解毒, 还是直接保护肝细胞免受损伤, 有待于进一步研究.

备注

编辑: 张海宁 电编: 潘伯荣

参考文献

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