修回日期: 2019-07-26
接受日期: 2019-07-26
在线出版日期: 2019-08-08
急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是外科常见急腹症, 病情凶险, 病死率高. 除了胰酶的自身消化损伤作用外, 多种炎症介质也参与了胰腺炎的发展进程, 使胰腺脏器损伤不断加重. 由于胰腺炎病程中的免疫异常极易导致多器官功能不全综合症的发生. 通过调节致炎/抗炎细胞因子, 改善机体免疫状态, 有利于炎症的控制和患者预后的提升. 此外, 针对特异性靶点进行联合治疗可以提高治疗效率, 而更为精准高效的治疗需要弄清其发生发展机制. miRNA是一种小非编码RNA分子, 研究发现其此外可作为AP的生物标志物, 还可以调控AP的细胞死亡, 可作为AP的治疗靶点. 而本文主要是从miRNA方面研究其对AP凋亡的影响, 对AP中相关炎症因子的影响及其可能的作用机制.
本研究的主题是miR-181a-5p对AP细胞损伤的影响, 拟解决的关键问题是了解miR-181a-5p是如何影响AP细胞的凋亡, 以及其和PIAS1之间的关系及它们对AP的影响, 在AP中的发生发展机制, 为以后临床上的诊断治疗等提供新思路和新靶点.
研究的主要目标即miR-181a-5p, PIAS1, AP之间的关系, 研究得到在AP中miR-181a-5p高表达, PIAS1低表达, 抑制miR-181a-5p表达和过表达PIAS1均可抑制雨蛙素处理AR42J和MPC-83细胞凋亡, 抑制炎症因子TNF-α和IL-6的表达, 且miR-181a-5p靶向负调控PIAS1. 可以从调控AP凋亡的途径及相关炎症因子水平等来调控其进展, 为其治疗提供新思路.
本研究首先是用雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡来构建AP的模型. 转染miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达的载体质粒, MTT检测细胞增殖活性, 流式细胞术检测细胞凋亡, Western blot检测PIAS1蛋白表达, qRT-PCR检测miR-181a-5p和PIAS1 mRNA表达水平, 酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达, 荧光素酶报告基因检测实验检测miR-181a-5p与PIAS1之间的靶向关系.
本实验的结果是在雨蛙素构建的AP模型细胞中, miR-181a-5p的表达水平升高, PIAS1的表达水平降低. 抑制miR-181a-5p表达、过表达PIAS1腺泡细胞凋亡率降低, TNF-α和IL-6的表达水平降低. miR-181a-5p靶向负调控PIAS1, 抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙素处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用; 达到了本实验的目的, 对该领域AP的发病进展机制又增加了相关的理论依据, 以后可以进一步在临床方面进行研究应用.
miR-181a-5p靶向负调控PIAS1; 抑制miR-181a-5p表达、过表达PIAS1抑制腺泡细胞凋亡和TNF-α和IL-6的表达. 可以通过调控PIAS1影响AP相关炎症因子的表达进而影响AP的进展. 从miRNA和其靶基因角度去研究其对AP的影响拓宽了研究的范围, 不同miRNA影响AP的进展的机制不同, 增加了其治疗的靶点. 不同的miRNA在AP中的表达及其作用机制不同, 可通过研究不同的miRNA及其靶基因和一些炎症分子对AP的影响可拓展研究思路. miR-181a-5p通过靶向负调控PIAS1影响腺泡细胞凋亡和TNF-α和IL-6的表达. 通过上调或下调miRNA可以影响AP的细胞的凋亡及其严重程度. 对未来临床诊断和治疗提供了新的标志物和新靶点.
仅对小鼠模型在理论层面上进行研究, 需要进一步在临床上进行相关研究和应用. 进一步深入研究miR-181a-5p和PIAS1对治疗AP小鼠的影响及其可能会产生的其他现象及是否会有副作用; 以及进一步向临床方向的研究靠拢. 寻找更接近于真实AP的小鼠或者与人AP更为相似的受体, 在其基础上进行实验治疗, 对其反应状况进行观察研究.