FTY720通过miR-494/MST1抑制结肠癌细胞并增加吉西他滨敏感性的分子机制

表1 吉西他滨对结肠癌SW1116细胞存活率的影响(mean±SD, n = 9)

吉西他滨浓度(μg/mL)	细胞存活率(%)
0	100.11±10.02
0.0001	95.14±9.26
0.001	86.84±8.73ab
0.01	70.16±7.14abc
0.1	54.18±5.27abcd
1	37.68±3.59abcde
F值	92.142
P值	<0.001

与0组比较,

^aP<0.05; 与0.0001组比较,

^bP<0.05; 与0.001组比较,

^cP<0.05; 与0.01组比较,

^dP<0.05; 与0.1组比较,

^eP<0.05.

表2 FTY720对SW1116细胞存活率的影响(mean±SD, n = 9)

FTY720浓度	细胞存活率(%)
0	100.01±10.01
2.5	87.67±8.37a
5	71.34±7.25ab
7.5	64.30±6.51abc
10	48.28±4.56abcd
12.5	39.97±4.03abcde
F值	93.224
P值	<0.001

与0组比较,

^aP<0.05; 与2.5组比较,

^bP<0.05; 与5组比较,

^cP<0.05; 与7.5组比较,

^dP<0.05; 与10组比较,

^eP<0.05.

表3 FTY720能增强吉西他滨对细胞SW1116细胞存活率凋亡及miR-494、MST1表达的影响(mean±SD, n = 9)

分组	miR-494	MST1蛋白	p21	Caspase-3	细胞存活率(%)	凋亡率(%)
Control	1.01±0.10	0.31±0.03	0.16±0.01	0.11±0.01	100.00±10.01	8.81±0.92
吉西他滨	0.38±0.04a	0.68±0.07a	0.52±0.05a	0.44±0.04a	54.16±5.27a	20.15±2.06a
FTY720	0.35±0.03a	0.75±0.07a	0.59±0.06a	0.48±0.05a	51.01±5.11a	22.37±2.48a
吉西他滨+FTY720	0.12±0.01abc	1.61±0.12abc	1.13±0.09abc	0.96±0.09abc	33.64±3.35abc	45.67±3.62abc
F值	415.714	144.618	134.545	119.569	174.905	43.759
P值	<0.001	<0.001	<0.001	<0.001	<0.001	<0.001

与control组比较,

^aP<0.05; 与吉西他滨组比较,

^bP<0.05; 与FTY720组比较,

^cP<0.05.

表4 过表达miR-494(mean±SD, n = 3)

分组	miR-494
miR-NC	1.00±0.09
miR-494	2.71±0.12a
t值	34.200
P值	0.000

与miR-NC组比较,

^aP<0.05.

表5 过表达miR-494能逆转FTY720、吉西他滨对细胞SW1116细胞存活率凋亡的影响(mean±SD, n = 9)

分组	p21	Caspase-3	细胞存活率(%)	凋亡率(%)
吉西他滨+FTY720	0.90±0.09	0.85±0.08	33.10±3.05	38.18±3.58
吉西他滨+FTY720+miR-NC	0.89±0.09	0.87±0.08	33.21±3.24	38.42±3.67
吉西他滨+FTY720+miR-494	0.41±0.04ab	0.30±0.03ab	69.18±7.03ab	15.96±1.62ab
F值	377.663	481.139	415.192	434.467
P值	<0.001	<0.001	<0.001	<0.001

与吉西他滨+FTY720组比较,

^aP<0.05; 与吉西他滨+FTY720+miR-NC组比较,

^bP<0.05.

表6 双荧光素酶报告实验(mean±SD, n = 9)

分组	WT-MST1	MUT-MST1
miR-NC	1.00±0.10	0.96±0.10
miR-494	0.21±0.02a	0.99±0.10
t值	23.240	0.636
P值	<0.001	0.534

与miR-NC组比较,

^aP<0.05.

表7 miR-494调控MST1的表达(mean±SD, n = 9)

分组	MST1 mRNA	MST1蛋白
miR-NC	1.01±0.10	0.30±0.03
miR-494	0.26±0.03a	0.08±0.01a
anti-miR-NC	0.96±0.10	0.32±0.03
anti-miR-494	2.67±0.26c	0.71±0.07c
F值	425.182	363.309
P值	<0.001	<0.001

与miR-NC组比较,

^aP<0.05; 与anti-miR-NC组比较,

^cP<0.05.

表8 抑制MST1可逆转FTY720和吉西他滨作用的SW1116的细胞存活率及凋亡的影响(mean±SD, n = 9)

分组	MST1 mRNA	p21	Caspase-3	细胞存活率(%)	凋亡率(%)
吉西他滨+FTY720	1.17±0.12	0.91±0.09	0.86±0.08	33.41±3.28	38.40±3.57
吉西他滨+FTY720+si-NC	1.18±0.12	0.92±0.09	0.84±0.08	33.37±3.30	38.27±3.56
吉西他滨+FTY720+si-MST1	0.51±0.05ac	0.56±0.05ac	0.38±0.04ac	62.68±5.98ac	18.14±1.66ac
F值	374.377	359.406	423.333	411.490	434.858
P值	<0.001	<0.001	<0.001	<0.001	<0.001

与吉西他滨+FTY720组比较,

^aP<0.05; 与吉西他滨+FTY720+si-NC组比较,

^cP<0.05.