幽门螺杆菌培养及抗原蛋白的分离纯化

表3 H. pylori抗原蛋白的纯化

抗原蛋白	初步分离	纯化	结果	参考文献
Urease	离心→重悬→超速离心	凝胶过滤层析(Superose 12 HR 10/30柱, 缓冲液20 mmol/L磷酸盐和0.15 mmol/L NaCl, pH7.4)→过夜透析→阴离子交换层析(DEAE-5PW SpHerogel TSK-IEX柱, pH7.0, 20 mmol/L磷酸盐缓冲液)→ 500 mmol/L NaCl线性梯度洗脱	尿素酶回收率为80%, 当把细菌暴露在200-1000 mL/L的乙醇中时, 总酶活力达70%, 尿素能被浓缩112倍, 总回收率达13%	Dunn et al[54],1990
Urease	离心	DEAE-SepHarose层析→pHenyl-SepHarose层析→Mono Q层析→Superose 6层析	尿素酶能浓缩1070倍, 产量达25%	Todd et al[55], 1987
Urease	重悬→细菌破碎→离心除膜	DEAE-琼脂糖凝胶层析(1.5-7.5 cm)→ 23℃, 分阶段性用PHenyl-琼脂糖凝胶 (1.5-12 cm), Mono-Q(HR5/5), Superose 6(1.0-29.5 cm)	尿素酶浓缩17倍, SDS-PAGE检验只有一条条带	Hu et al[56],1990
Urease	离心→重悬→ 细菌破碎→ 离心除膜	DEAE-SepHarose柱层析→pHenyl-SepHarose柱层析→Mono-Q柱层析→ Superose 6柱层析	尿素酶吸光度2.0A	Hu et al[56],1990
Urease	离心→重悬→ 细菌破碎→超滤	离子交换层析(Source Q15离子交换柱), NaCl梯度洗脱	H. pylori阳性检出率100％(12/12), 阴性符合率100％(18/18). 特异性良好	白慕群 et al[57], 2000
VacA	离心→盐析→离心→重悬	疏水作用层析(pHenyl-Superose HR 5/5柱)→凝胶过滤层析(Superose 12 HR 16/50柱)→阴离子交换层析(Mono-Q HR 515柱, NaCl梯度洗脱)	3/4过三步层析后, 空泡毒素效价在24 000±5600, 浓缩倍数能够达到5333倍	Cover et al[58], 1992
VacA	离心→盐析→ 离心→重悬→微滤	凝胶过滤层析(Superose 12 HR 16/50或Superose 6 HR 16/50柱, 60 mmol/L Tris, 100 mmol/L NaCl, pH7.5)		Cover et al[58], 1992
VacA	离心→盐析→密度梯度离心	自动Densi-Flow IIC装置		Cover et al[59],1997
VacA	溶菌酶处理→超声波→离心	NiTEMTM树脂柱平衡后, 用混合液(50 mmol/L Tris, pH8.0, 300 mmol/L NaCl, 20 mmol/L Imidazole)洗脱 →离心		段秀杰 et al[50], 2006
VacA	盐析→离心→ 透析→离心	吸附层析→盐析→重悬→透析→疏水作用 层析(PHeny1-SepHarosc CL-4B柱)→阴离子交换层析(DEAE-E ScpHamsc FF柱, NaCl连续梯度洗脱→凝胶过滤层析→透析→离心→快速蛋白液相层析系统(FPLC)AKTA explorer-900	VacA蛋白浓度为0.125 mg/mL, 比活力达20 480, 与上清Ô液相比纯化倍数达4551, 产率为5 ug/L	杜奕奇 et al[60], 2002
CagA	离心	SepHadexG25凝胶过滤层析→阴离子 交换介质(High Q), 梯度洗脱	3/4生物电泳图象分析系统的密度扫描鉴定, 所得产物的纯度为90％	龚岷 et al[61], 2001
CagA	离心	金属螯合层析	3/4密度扫描鉴定, 这种方法所得产物的纯度为94.5%	龚岷 et al[61], 2001
CagA	用6 mol/L胍透析菌液	凝胶过滤层析		Ye et al[62], 2003
LPS	酶处理	辛基琼脂糖层析(用0.1 mmol/L醋酸钠, 0.5 mmol/L NaCl, pH4.7的缓冲液洗脱. 30%-60%的线性梯度洗脱) →PD-10脱盐柱, 2 g/L三乙胺平衡柱子		Yokota et al[63], 2007
LPS	苯酚-氯仿-石油醚处理→离心	上清液中脂多糖沉淀→离心		Slomiany et al[64], 2003
LPS	超声波→离心	抽提离心→透析→DNA和RNA酶作用→ 水浴→离心→上清加无水乙醇→离心→ 沉淀用蒸馏水悬浮→透析		严杰 et al[65], 1994