幽门螺杆菌 Open Access
Copyright ©The Author(s) 2003. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2003-05-15; 11(5): 562-564
在线出版日期: 2003-05-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i5.562
Hp对慢性萎缩性胃炎内皮素及一氧化氮水平影响的实验与临床研究
郭昱, 郭霞, 姚希贤
郭昱, 姚希贤, 河北医科大学第二医院 河北省石家庄市 050000
郭昱, 女, 1972-05-16生, 河北省深县人, 汉族. 1995年河北医科大学本科毕业, 1999年河北医科大学硕士研究生毕业, 主治医师. 主要从事消化系统疾病的研究.
郭霞, 河北医科大学第四医院 河北省石家庄市 050011
通讯作者: 姚希贤, 050000, 河北省石家庄市, 河北医科大学第二医院.
电话: 0311-7046901-6511
收稿日期: 2002-07-26
修回日期: 2002-08-20
接受日期: 2002-09-12
在线出版日期: 2003-05-15

目的

试图通过实验与临床研究观察Hp根除前后慢性萎缩性胃炎(CAG)NO和ET水平的改变, 从这一角度出发探讨Hp相关CAG的发病机制.

方法

(1)实验研究: 采用SS1 Hp菌株, 3％水杨酸钠、5％乙醇, 5 mmol/L去氧胆酸钠灌胃, 加以饥饱失常, 制作Hp相关CAG大鼠模型. 模型大鼠随机分成3组: (a) Hp根除组: 根除Hp三联(德诺、阿莫西林、甲硝唑)治疗2 wk. (b) 模型自然恢复组: 采用蒸馏水灌胃. (c)正常对照组: 正常大鼠.治疗结束后3 mo处死全部大鼠, 进行Hp、病理组织学检查及血清一氧化氮(NO)、内皮素(ET)含量测定. (2) 临床研究: 选择Hp阳性CAG患者42例, Hp阴性CAG患者25例, Hp阳性慢性浅表胃炎(CSG)21例, 分别进行Hp、病理组织学检查及血中NO和ET测定.

结果

实验CAG模型中, Hp根除组血清NO、ET含量[(3672±1845) ng/ml, (181.14±22.5)×10-3 ng/ml]较模型自然恢复[(5887±1896) ng/ml, (211.67±34.36)×10-3 ng/ml]显著减低, P<0.01, 但仍未达正常水平[(2461±949)ng/ml, (135.42±27.46)×10-3 ng/ml]. 临床研究 Hp阳性CAG患者, 血清NO(5834±1896)ng/ml、ET(91.18±34.19)×10-3 ng/ml明显高于Hp阴性CAG[(2773±1896) ng/ml, (68.37±14.24)×10-3 ng/ml], P<0.01, 也高于Hp阳性CSG患者[(3 420±1 024) ng/ml, (68.90±19.47)×10-3ng/ml], P<0.01.

结论

Hp相关CAG血中NO和ET水平显著升高, 二者呈正相关, 根除Hp后, NO和ET水平显著降低.

关键词: N/A
引文著录: 郭昱, 郭霞, 姚希贤. Hp对慢性萎缩性胃炎内皮素及一氧化氮水平影响的实验与临床研究. 世界华人消化杂志 2003; 11(5): 562-564
Changes of nitricoxide and endothelin in Helicobacter pylori associated chronic atrophic gastritis before and after eradication: an experimental and clinical study
Yu Guo, Xia Guo, Xi-Xian Yao
Yu Guo, Xi-Xian Yao, Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei Province, China
Xia Guo, Forth Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050011, Hebei Province, China
Correspondence to: Dr. Xi-Xian Yao, Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei Province, China.
Received: July 26, 2002
Revised: August 20, 2002
Accepted: September 12, 2002
Published online: May 15, 2003

AIM

To investigate the changes of nitric oxide (NO) and endothelin(ET) in rats and patients with Helicobacter pylori associated chronic atrophic gastritis (CAG) before and after eradication, and to explore the possible mechanism of Helicobacter pylori associated CAG.

METHODS

Helicobacter pylori associated CAG Wistar rat model was induced with sodium, eoxycholate, sodium salicylate, ethanol and culture broth of H.pylori which were orally administered. Model rats were randomly divided into three groups: Group A: Helicobacter pylori eradication with standard triple therapy for two weeks (Amoxicilline+ Timidazole + Denol); Group B: naturally restoring group, only given distilled water as placebo; Group C: the normal control. 3 months after treatment, all the rats were killed. The blood level of NO and ET was measured. 42 caes of Helicobacter pylori infected CAG patients, 25 Helicobacter pylori uninfected CAG patients, and 21 Helicobacter pylori infected chronic superficial gastritis (CSG) patients were included in this study. The blood level of NO and ET was measured.

RESULTS

The blood level of NO and ET was lower in Helicobacter pylori eradication group[(3672±1 845)ng/ml, (181.14±22.5)×10-3ng/ml ]than those in naturally restoring group [(887±1 896)ng/ml, (211.67±34.36)×10-3ng/ml], P<0.01. The blood level of NO and ET was higher in Hp infected CAG [(5834±1896) ng/ml, (91.18±34.19)×10-3 ng/ml] than those in Hp uninfected CAG [(2 773±1 896) ng/ml, (68.37±14.24)×10-3 ng/ml] and infected CSG patients [(3420±1024) ng/ml, (68.90±19.47)×10-3 ng/ml](P<0.01).

CONCLUSION

Helicobacter pylori associated CAG is accompanied by an enhanced serum NO and plasma ET. This may be one of the pathogenic mechanisms of Helicobacter pylori associated CAG.

Key Words: N/A
0 引言

研究表明Hp与慢性萎缩性胃炎(CAG)的发生、发展密切相关, 但其致病机制目前尚不十分明了. 以往研究多从Hp细菌毒素及其诱发的自身免疫反应探讨Hp相关CAG的致病机制, 我们试图通过实验与临床研究, 观察Hp根除前后CAG内皮素(ET)、一氧化氮(NO)的水平, 拟从这一角度出发探讨Hp相关CAG的发病机制.

1 实验研究
1.1 材料和方法

二级、♂Wister大鼠, 体重90-110 g. 购自北京协和医科大学实验动物部, 分笼喂养, 每笼4-6只. ET放免药盒由北京北方免疫试剂研究所提供, Hput试剂由福建三强生物化工有限公司提供, 美国Waters公司产阴离子分析柱(IC-Pak Anion, 4.6×5cm)、810高压液相仪及486紫外检测器.

1.2 方法

(1)Hp相关CAG大鼠模型制作: 根据文献[1-7]报道加以改进, 制作Hp相关CAG大鼠模型. (a) SS1Hp菌株(布氏肉汤洗脱菌落)CFU109/ml灌胃, 1.5 ml/只, 共5次, 1 wk内完成. (b)胃黏膜损伤因子: 水杨酸钠用蒸馏水制成3％溶液, 灌胃3 ml/只, 1次/d, 灌胃前后禁食水1 h; 5％乙醇与5 mml/L去氧胆酸钠溶液(蒸馏水配制)作为饮料隔日交替自由饮用. (c) 饥饱失常: 2 d饱食, 1 d禁食. 于Hp菌株末次接种12 wk后分别处死模型组大鼠10只, 正常大鼠8只, 观察病变形成情况. 结果模型大鼠全部感染Hp (10/10只), 黏膜固有层变薄可见明显炎症细胞浸润, 壁细胞减少. 此模型符合人类CAG病因及病理变化, 可作为Hp相关CAG发病机制研究的较为理想的动物模型. (2)动物分组: 模型大鼠20只, 随机分成以下各组: (a)Hp根除组: 标准三联(德诺40 ml/Kg/d, 阿莫西林166.7 mg/Kg/d, 甲硝唑66.7 mg/Kg/d)灌胃2 wk; (b)模型自然恢复组: 等量蒸馏水灌胃. (c)正常对照组: 正常大鼠10只作为正常对照. (3)标本留取: 全部大鼠于停药3 mo后, 禁食20 h, 乙醚麻醉, 取血, 分离血清、血浆, 处死动物取出胃, 沿胃大弯方向剪开, 分别于胃大、小弯及前后壁取黏膜组织各1块, 进行Hp检测. (4)Hp检测方法: (a)细菌培养. (b)胃黏膜涂片Gram染色. (c)尿素酶实验. (d)组织切片改良Gimesa染色, Hp阳性制定标准为四项中任何两项阳性; Hp根除标准为停药1 mo以上上述四项检查皆阴性. (5)血浆ET测定: 采用放免法同批检测, 操作步骤严格按照说明书进行. (6)血清NO测定: 血样2 ml, 室温静置析出血清后, 离心10 min, 分离血清, －70 ℃保存待测, 采用高效液相法同批检测, 以血浆中NO2－/ NO3－总量间接显示体内NO的生成量.

统计学处理 全部计量资料以表示, 两样本均数比较采用t检验, 多组均数比较采用方差分析, 当P<0.05差异有显著性.

1.3 结果

本研究结果表明, Hp根除组血清ET及NO含量[(181.14±22.5)×10-3 ng/ml、(3 672±1 845) ng/ml]较模型自然恢复组[(211.67±34.36) ×10-3 ng/ml 、(5 887±1 896) ng/ml]明显降低, 均P<0.01.(表1)

表1 大鼠各实验组NO、ET水平比较(x±s).
组别nET×10-3 ng/mlNO ng/ml
根除Hp组10181.14±12.57ab3 552±1 038ab
模型自然恢复组9211.67±34.36a6 787±1 396a
正常组10135.42±27.462 461±949
aP <0.01, vs 正常组
bP <0.01, vs 模型自然恢复组.
2 临床研究
2.1 材料和方法

(1)患者情况: 选择年龄在18-65岁经胃镜检查、胃黏膜活检确诊的CAG患者67例, 男31例, 女11例, 平均年龄(52.94±9.8)岁, 其中Hp阳性42例, 男35例, 女7例, 平均年龄(49.74±5.8)岁, Hp阴性25例, 男21例, 女4例, 平均年龄(55.79±10.26)岁, Hp阳性CSG患者22例, 男13例, 女9例, 平均年龄(49.25±6.93)岁, 以上对象均2 wk内未接受过铋剂, 质子泵抑制剂和抗生素, 并除外消化溃疡、胃癌及严重心、肺、肝、肾功能损害. (2)方法: (a)标本留取: 所有病例均于做胃镜时自距幽门口2-3 cm取胃黏膜组织6块, 分别进行Hp检测, 病理组织学检查, 取空腹静脉血4 ml, 分离血清血浆, 备用. (b)Hp检测: 检测方法, 判定标准同实验研究. (c)NO、ET的检测: 检测方法同实验研究.

2.2 结果

(1)CAG患者Hp阳性与阴性者之间NO、ET水平比较: Hp阳性CAG患者NO(5 834±1 896) ng/ml、ET(91.18±34.19)×10-3 ng/ml明显高于Hp阴性者(2 773±1 896) ng/ml、(68.37±14.24)×10-3 ng/ml, P<0.01). (表2). (2)Hp阳性CAG与CSG患者之间NO、ET水平比较: Hp阳性CAG患者血清NO、ET含量明显高于Hp阳性CSG[(3 420±1 024) ng/ml、(68.90±19.47) ×10-3 ng/ml]患者, 均P<0.01). (表3).

表2 Hp阳性、阴性CAG患者NO、ET水平比较(x±s).
组别nET ×10-3ng/mlNO ng/ml
Hp阳性CAG4291.18±34.19a5 834±1 896a
Hp阴性CAG2568.37±14.242 773±823
aP <0.01.
表3 Hp阳性CAG、CSG患者NO、ET水平比较(x±s).
组别nET ×10-3ng/mlNO ng/ml
CAG4291.18±34.19b5 834±1 896b
CSG2268.90±19.473 420±1 024
aP <0.05,
bP <0.01.
3 讨论

ET是由21个氨基酸残基组成的生物活性多肽, 可引起血管痉挛和组织器官功能损伤, 是目前已知的缩血管活性最强的多肽物质. 除血管内皮细胞外许多组织器官均能产生ET, 大鼠胃窦及胃体均证明有ET免疫活性物质存在, 内毒素、缺氧、TNF等能促进ET合成, NO、PGI等则抑制ET的产生. 有报道ET是强烈的致溃疡因子[8], 但ET在CAG, 尤其是在Hp相关CAG中有何作用, 尚有待进一步研究. 李雅君et al [9]报道CAG患者GMBF减低, ET与GMBF呈负相关, r =-0.625, P<0.001. 另外Koath的动物实验发现ET引起胃黏膜损害是以毛细血管充血和GMBF减少为特征. 本研究发现Hp根除组大鼠血浆ET含量(181.14±22.56)×10-3ng/ml明显低于模型自然恢复组(211.67±34.36)×10-3ng/ml, P<0.01仍未恢复到正常水平(135.42±27.46)×10-3 ng/ml, P<0.01. Hp阳性CAG患者血浆ET含量高于Hp阴性者, 也高于Hp阳性CSG[分别为(91.18±34.19)×10-3 ng/ml, (68.37±14.24)×10-3 ng/ml, (68.90±13.47)×10-3 ng/ml, 均P<0.01], 表明Hp相关CAG血浆ET明显增高, 提示ET在Hp相关CAG中的作用机制可能与Hp感染损伤血管内皮及胃黏膜组织, 致ET大量释放, 从而引起血管收缩, GMBF减少, 导致黏膜缺血缺氧有关.

NO是一种神经递质和信使分子, 由NO合成酶(NOS)催化底物左旋精氨酸产生. NOS主要有两种异构体即原生型(CNOS)和诱生型NOS(iNOS). CONS主要存在于神经元和血管内皮细胞内, 合成NO的量极少, iNOS几乎分布于所有组织中, 一般情况下不表达, 在受到内毒素或各种细胞因子刺激后被激活, 可生成大量NO. NO的作用因剂量、作用时间的不同而有很大差异. 早期、小剂量NO可以抑制ET产生, 增加GMBF, 具有细胞保护作用[10-14]. 如事先给予小剂量NO供体以提供外源性NO, 可以减轻或预防许多实验性急性胃黏膜病变; 抑制内源性NO生成将使病变加重, 若同时应用NO的前体物质左旋精氨酸则可逆转这种作用[15]. 当iNOS被激活释放大量NO时, 此过量生成的NO一方面将发挥其自由基(或继发生成的高活性羟自由基)性质的细胞毒作用, 直接损害胃黏膜血管内皮细胞, 刺激NO更多释放, 形成恶性循环. 另一方面失去对ET的抑制, GMBF减少[16]. 本研究结果显示Hp感染CAG的NO水平显著升高, 且与ET呈正相关, Hp感染CAG大鼠根除Hp后NO水平显著降低, 推测可能是Hp内毒素或Hp感染时IL-1、IL-8、TNF等细胞因子促使血管内皮细胞释放大量NO[17,18]. 此外, 研究表明NO的代谢产物NO2-质子化形成N2O3, N2O3一旦形成, 可通过其芳香基重氮化, 从而造成碱基误配, 细胞突变[19,20]. 另有研究表明高浓度NO或细胞长时间接触NO时, 由于NO与细胞色素氧化酶结合后难以解离而使ATP生成减少, 因此发生细胞凋亡, 亦参与了Hp相关CAG的发病过程[21-24].

1.  曾 志荣, 胡 品津, 陈 旻湖, 于 丰彦, 陈 为, 彭 晓忠. 幽门螺杆菌长期感染鼠腺胃模型的研究. 中华医学杂志. 1998;78:494-497.  [PubMed]  [DOI]
2.  李 兆申, 全 山丛, 许 国铭, 王 世祥. 综合法制作大鼠萎缩性胃炎模型的实验研究. 中华医学杂志. 1992;72:81-83.  [PubMed]  [DOI]
3.  范 英昌, 张 斌, 胡 利明, 徐 东琴, 高 金亮. 大鼠脾气虚型慢性萎缩性胃炎动物模型的实验研究-胃黏膜病理形态及超微结构改变的研究. 天津医药杂志. 1994;22:86-88.  [PubMed]  [DOI]
4.  张 沥, 张 玲霞, 徐 俊荣, 曹 广周, 江 梅, 张 宁霞, 贾 长河. 热盐水致大鼠萎缩性胃炎动物模型建立. 世界华人消化杂志. 2002;10:571-575.  [PubMed]  [DOI]
5.  袁 红霞, 杨 曼. 胃二号方对CAG模型大鼠胃肠道激素的作用. 世界华人消化杂志. 2000;8:1424-1226.  [PubMed]  [DOI]
6.  姒 建敏, 吴 加国, 曹 倩, 项 尊, 姜 玲玲, 吕 文, 黄 怀德. 鼠慢性萎缩性胃炎模型的建立及致萎缩因素探讨. 中华消化杂志. 2001;21:75-79.  [PubMed]  [DOI]
7.  姚 金锋, 姚 希贤. 慢性萎缩性胃炎与幽门螺杆菌感染的关系. 世界华人消化杂志. 2000;8:1042-1046.  [PubMed]  [DOI]
8.  Konturek PC, Konturek SJ, Bobrzynski A, Kwiecien N, Obtulowicz W, Stachura J, Hahn EG, Rembiarz K. Helicobacter pylori and impaired gastric secretory functions associated with duodenal ulcer and atrophic gastritis. J Physiol Pharmacol. 1997;930:365-373.  [PubMed]  [DOI]
9.  李 雅君, 张 泰昌, 朱 美中, 杨 莉. 老年慢性胃炎和溃疡病黏膜血流测定及其与内皮素的关系. 中华消化杂志. 1996;16:185.  [PubMed]  [DOI]
10.  闫 长栋, 李 平, 祁 友健. 大鼠胃扩张致胃酸分泌中NO对胃黏膜血流量的影响. 世界华人消化杂志. 2000;8:1067-1069.  [PubMed]  [DOI]
11.  曾 锦章, 张 万岱, 刘 晓霞, 张 振书, 张 亚历, 周 殿元. 蛋白酪氨酸激酶与一氧化氮合酶活性的变化在胃黏膜损伤修复中的作用和意义. 世界华人消化杂志. 2000;8:354-355.  [PubMed]  [DOI]
12.  张 辉, 任 锡玲, 姚 希贤. 慢性胃病T细胞亚群、一氧化氮、氨基己糖含量与HP感染的研究. 世界华人消化杂志. 1999;7:127-129.  [PubMed]  [DOI]
13.  严 海密, 李 运科. 慢性胃病中一氧化氮的研究进展. 世界华人消化杂志. 1999;7:355-356.  [PubMed]  [DOI]
14.  余 贤恩, 罗 绮凝. 外源性一氧化氮对豚鼠酸化乙醇性胃黏膜损伤的保护作用. 世界华人消化杂志. 2000;8:224.  [PubMed]  [DOI]
15.  张 在兴, 才 文彦, 祝 学光. 一氧化氮与急性胃黏膜病变. 国外医学生理、病理科学与临床分册. 1997;17:61-63.  [PubMed]  [DOI]
16.  徐 章, 王 子强, 卞 旭鹏, 张 兵, 李 毅, 张 洁琴. 慢性胃炎消化性溃疡患者血ET1, CGRP, NO的变化. 世界华人消化杂志. 1999;7:448-449.  [PubMed]  [DOI]
17.  徐 克强, 张 万岱, 王 继德, 李 子旭, 周 殿元, 张 亚历, 黄 文峰, 姜 泊, 孙 勇. 幽门螺杆菌细胞毒素促进胃黏膜分泌白介素8作用. 世界华人消化 杂志. 2002;10:907-911.  [PubMed]  [DOI]
18.  黄 海力, 吴 本俨. H.pylori感染与细胞因子. 世界华人消化杂志. 2002;10:86-89.  [PubMed]  [DOI]
19.  沈 靖, 王 润田, 徐 希平. NO, iNOS与胃癌关系的研究进展. 世界华人消化杂志. 2000;8:320-322.  [PubMed]  [DOI]
20.  史 树贵, 邵 淑琴. 一氧化氮与细胞凋亡. 国外医学生理、病理科学与临床分册. 1997;17:267-270.  [PubMed]  [DOI]
21.  焦 鸿丽, 杨 和平, 杨 永宗. 一氧化氮介导的细胞凋亡. 国外医学生理、病理科学与临床分册. 1997;17:134-136.  [PubMed]  [DOI]
22.  晏 楠, 吕 农华. 幽门螺杆菌感染及其代谢产物一氧化氮对胃上皮细胞凋亡的影响. 中华消化杂志. 2000;20:45-49.  [PubMed]  [DOI]
23.  胡 品津, 曾 志荣, 林 汉良, 陈 旻湖, 陈 为, 彭 晓忠. 幽门螺杆菌的根除与萎缩性胃炎形成和逆转的动物实验研究. 中华消化杂志. 2000;20:155-158.  [PubMed]  [DOI]
24.  刘 海峰, 刘 为纹, 房 殿春, 王 国安, 滕 小春. 幽门螺杆菌感染与胃癌前病变演化的关系. 世界华人消化杂志. 2002;10:912-916.  [PubMed]  [DOI]