广西婴儿特发性肝内胆汁淤积SLC25A13基因突变的筛查

表1 PCR扩增SLC25A13外显子的基因序列

突变类型	引物序列 外显子		产物长度(bp)
[Ⅰ]851-854del	上游5'-AAAGGAGGTTAGGAGGAGGGC-3'	9	321
	下游5'-GGCAACTGCAAGTGGAACAGG-3'
[Ⅱ]IVS11+1G>A	上游 5'-TGCAGAACCAACGATCAACTG-3'	11	205
	下游 5'-ACGCAGTCTTGCTAATTCATGT-3'
[Ⅲ]1638-1660dup23	上游 5'-TGTTGTGTCTCTCCTGCAGG-3'	16	123
	下游 5'-GCAGTCTATCACTCCGCTGT-3'
[Ⅳ]S225X	上游 5'-GGAGAGTACAAGTTCTGGTC-3'	7	426
	下游 5'-ACTAGTTGCCTTCTTCACCC-3'
[V]ⅣS13+1G>A	上游 5'-GTGAACGATTTTGTGAGGGATA-3'	13	210
	下游 5'-CCTAGTAGACTCTGCCCTTG-3'
[Ⅵ]1800-1801insA	上游 5'-CTAATTATATCTGTGATTTCTCCA-3'	17	307
	下游 5'-GGAGTTGATACATTCTCATCAG-3'
[Ⅶ]R605X	上游 5'-CTAATTATATCTGTGATTTCTCCA-3'	17	307
	下游 5'-GGAGTTGATACATTCTCATCAG-3'
[Ⅷ]E601X	上游 5'-CTAATTATATCTGTGATTTCTCCA-3'	17	307
	下游 5'-GGAGTTGATACATTCTCATCAG-3'
[Ⅸ]E601K	上游 5'-CTAATTATATCTGTGATTTCTCCA-3'	17	307
	下游 5'-GGAGTTGATACATTCTCATCAG-3'
[Ⅹ]ⅣS6+5G>A	上游5'-TGAGGGCTTGTTAGATCAAGAT -3'	6	467
	下游 5'-TTACCCAGACAACAAATTAACCT-3'
[Ⅺ]R184X	上游 5'-TGAGGGCTTGTTAGATCAAGAT -3'	6	467
	下游 5'-TTACCCAGACAACAAATTAACCT-3'
[ⅪⅤ]Ⅳ+1G>C	上游 5'-TGAGGGCTTGTTAGATCAAGAT -3'	6	467
	下游 5'-TTACCCAGACAACAAATTAACCT-3'

表2 PCR扩增SLC25A13外显子的反应条件

扩增子	预变性(℃, min)	变性(℃, s)	退火(℃)	延伸(℃, min)	循环次数
外显子6	94, 3	94, 30	55	72, 1	35
外显子7	94, 3	94, 30	56	72, 1	35
外显子9	94, 3	94, 30	62	72, 1	30
外显子11	94, 3	94, 30	50	72, 1	40
外显子13	94, 3	94, 30	57	72, 1	35
外显子16	94, 3	94, 30	60	72, 1	35
外显子17	94, 3	94, 30	54	72, 1	35

最后一个循环延伸4 min.

表3 5例疑似为新生儿肝内胆汁淤积症患儿肝功能

项目	1	2	3	4	5	mean±SD	参考范围
总胆红素(μmol/L)	153.9	118.7	91.8	230.8	115.6	143.24±54.62	3.00-22.00
直接总胆汁酸(μmol/L)	57.7	68	71.9	171.1	70.3	87.80±46.80	0.00-6.00
胆红素(μmol/L)	244.8	196.7	103.5	226.8	211	196.56±55.02	0.00-10.00
谷丙转氨酶(U/L)	22	78	88	42	25	51.00±30.39	5.00-40.00
谷草转氨酶(U/L)	98	201	117	118	132	133.20±39.78	8.00-45.00
谷氨酰转肽酶(U/L)	183	343	1007	58	94	337.00±390.36	0.00-50.00
血乳酸(mmol/L)	3.04	4.69	-	3.19	4.9	3.95±0.97	0.63-2.44
血氨(μg/dL)	183	101	130	177	151	148.40±33.93	0.00-75.00

表4 5例考虑为Citrin缺陷病患儿血串联质谱和尿气相质谱分析

项目		1	2	3	4	5	mean±SD	参考范围
血串联质谱
甲硫氨酸		107.44	90.4	58.5	54.54	98.7	81.91±23.99	8-35
酪氨酸		114.17	53.57	195.34	142.25	132.7	127.54±51.20	20-100
瓜氨酸		127.36	101.0	71.06	75.09	90.53	93.00±22.64	7-35
苏氨酸		117.7	115.18	106.34	108.74	121.2	113.83±6.18	15-100
C14-1		0.29	0.37	0.39	0.38	0.31	0.34±0.04	0.02-0.25
C16-1		3.57	2.84	5.27	2.4	4.13	3.64±1.12	0.3-2
C18-1		1.23	0.68	1.67	0.56	0.76	0.98±0.46	0.2-1.2
尿气相质谱分析
苯乳酸-2		17.98	8.92	32.61	7.74	13.25	16.1±10.07	0-4.9
4-羟基苯乙酸		326.03	87.9	465.8	62.95	97.5	208.03±178.93	8.6-73.2
4-羟基苯乳酸-2	2 656.56		963.02	487.53	2218.3	1784.3	1 621.9±890.7	0-7
4-羟基苯丙酮酸		12.55	-	26.83	2.78	4.75	11.72±10.91	0-0.9