miRNA干扰质粒的构建及其对肝癌HepG2细胞IGF-Ⅱ表达的抑制作用

表1 IGF-Ⅱ miRNA Oligo序列及阴性序列

名称	寡聚核苷酸单链DNA序列
MR122-1	F: 5'-TGCTGCAGCAATGCAGCACGAGGCGAGTTTTGGCCACTGACTGACTCGCCTCGCTGCATTGCTG-3'
	R: 5'-CCTGCAGCAATGCAGCGAGGCGAGTCAGTCAGTGGCCAAAACTCGCCTCGTGCTGCATTGCTGC-3'
MR122-2	F: 5'-TGCTGTAAGCAGCAATGCAGCACGAGGTTTTGGCCACTGACTGACCTCGTGCTATTGCTGCTTA-3'
	R: 5'-CCTGTAAGCAGCAATAGCACGAGGTCAGTCAGTGGCCAAAACCTCGTGCTGCATTGCTGCTTAC-3'
MR122-3	F: 5'-TGCTGTGCGACGGCTCACACGGCTTGGTTTTGGCCACTGACTGACCAAGCCGTGAGCCGTCGCA-3'
	R: 5'-CCTGTGCGACGGCTCACGGCTTGGTCAGTCAGTGGCCAAAACCAAGCCGTGTGAGCCGTCGCAC-3'
MR122-4	F: 5'-TGCTGTCAACGATGCCACGGCTGCGAGTTTTGGCCACTGACTGACTCGCAGCCGGCATCGTTGA-3'
	R: 5'-CCTGTCAACGATGCCGGCTGCGAGTCAGTCAGTGGCCAAAACTCGCAGCCGTGGCATCGTTGAC-3'
阴性	F: 5'-TGCTGAAATGTACTGCGCGTGGAGACGTTTTGGCCATGACTGACGTCTCCACGCAGTACATTT-3'
	R: 5'-CCTGAAATGTACTGCGTGGAGACGTCAGTCAGTGGCCAAAACGTCTCCACGCGCAGTACATTTC-3'

表2 构建的4种干扰载体对HepG2细胞干扰效率比较

分组	IGF-ⅡCt值	ΔCt	ΔΔCt	2ΔΔCt	沉默效率(1-2ΔΔCt)
MR-IGF-Ⅱ-1组	28.42±0.19	17.70	0.58	0.67	0.33
MR-IGF-Ⅱ-2组	28.09±0.26	17.92	0.80	0.57	0.43
MR-IGF-Ⅱ-3组	27.23±0.22	16.98	-0.14	1.10	0.00
MR-IGF-Ⅱ-4组	27.60±0.13	17.17	0.05	0.97	0.03
阴性组	26.74±0.13	17.12	0.00	1.00	0.00

表3 MR-IGF-Ⅱ-2干扰载体转染HepG2细胞IGF-Ⅱ基因的沉默效率 (mean±SD)

分组	GAPDH Ct	IGF-II Ct	ΔCt	ΔΔCt	2ΔΔCt	沉默效率(1-2ΔΔCt)
24 h
正常组	10.07±0.12	20.97±0.12	10.90
阴性组	9.97±0.12	20.90±0.17	10.93	0.03	0.979	0.02
干扰组	9.87±0.12	21.37±0.38	11.50	0.60	0.659	0.34
48 h
正常组	10.93±0.15	25.43±0.72	14.50
阴性组	10.83±0.12	25.35±0.50	14.52	0.02	0.986	0.01
干扰组	10.50±0.35	25.83±0.21	15.33	0.83	0.562	0.44
72 h
正常组	9.73±0.15	23.47±0.46	13.74
阴性组	9.67±0.06	23.43±0.23	13.76	0.02	0.986	0.01
干扰组	9.70±0.10	24.23±0.25	14.53	0.79	0.578	0.42

表4 miRNA干扰质粒对肝癌细胞IGF-Ⅱ蛋白表达的影响 (mean±SD, n = 3)

分组	IGF-Ⅱ(mg/g总蛋白)	q值
正常组	113.23±4.66
阴性组	102.60±4.23	4.0949
干扰组
24 h	73.83±3.83b	15.6483
48 h	64.34±4.42b	19.4108
72 h	63.88±4.54b	19.5837

^bP<0.01 vs 正常组.