联合应用TGF-β、TGF-βR siRNA对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路相关基因表达的抑制

表1 TGF-β1及其受体siRNA序列

基因	siRNA基因序列
TGF-β1
	正义链: 5'-GUCAACUGUGGAGCAACACDTDT-3'
	反义链: 5'-GUGUUGCUCCACAGUUGACDTDT-3'
TβRⅠ
	正义链: 5'-AGUCGGUUAACAGCGAUCU-3'
	反义链: 5'-UUUCAGCCAAUUGUCGCUAGA-3'
TβRⅡ
	正义链: 5'-GUCUUGCAUGAGCAACUGC-3'
	反义链: 5'-UUCAGAACGUACUCGUUGACG-3'
无关siRNA
	正义链: 5'-GACUUCAUAAGGCGCAUGC-3'
	反义链: 5'-UUCUGAAGUAUUCCGCGUACG-3'

表2 有关基因扩增用RT-PCR引物序列及产物大小

名称	引物序列	PCR产物(bp)
α-SMA	ACT GGG ACG ACA TGG AAA AG	368
	GAT GGA TGG GAA AAC AGC C
Ⅰ型胶原	CAT AAA GGG TCA TCG TGG CTT C	789
	GTG ATA GGT GAT GTT CTG GGA G
Ⅲ型胶原	AAC CCA GTA TTC TCC ACT CTT	349
	CGA GGT AAC AGA GGT GAA AGA
TGF-β1	CAA AGA CAT CAC ACA CAG TA	441
	AGG TGT TGA GCC CTT TCC AG
Smad3	AAG GGC GAG CAG AAC GGG	425
	GGG ATG GAA TGG CTG TAG TC
PCNA	AAC TTG GAA TCC CAG AAC A	293
	AGA CAG TGG AGT GGC TTT T
TGF-α	ACC TGC AGG TTT TTG GTG CAG	239
	GCA GAC GAG GGC ACG GCA CCA
GAPDH	GGT GAA GGT CGG TGT GAA CGG A	245
	TGT TAG TGG GGT CTC GCT CCT G
β-actin	GCT GTC CCT GTA TGC CTC T	461
	GGT CTT TAC GGA TGT CAA CG

表3 不同shRNA干预组ALT、AST及HA的测定结果 (mean±SD)

分组	ALT(U/L)	AST(U/L)	HA(μg/L)
N组	52.70±11.0	108.80±20.4	111.45±24.24
M组	949.50±196.1b	985.67±274.8b	8444.65±812.15b
T组	592.80±98.4d	686.80±112.3d	5682.80±824.14d
T+R1组	440.80±91.9d	591.00±99.87d	2871.26±394.68d
T+R2组	461.61±120.0d	607.50±84.8d	3004.29±354.25d
T+R1+R2组	284.00±49.0df	398.30±61.9df	1982.12±402.71df

^bP<0.01 vs N组;

^dP<0.01 vs M组;

^fP<0.01 vs T组.

表4 不同siRNA干预后肝组织中各项指标mRNA表达量与GADPH基因或β-actin基因表达量的比值 (mean±SD)

分组	α-SMA	COL-1	COL-3	TGF-β1	Smad3	PCNA	TGF-α
N组	0.02±0.01	0.04±0.03	0.11±0.04	0.22±0.03	0.18±0.05	0.29±0.06	0.31±0.06
M组	0.91±0.26b	0.87±0.11b	0.95±0.16b	0.96±0.11b	0.91±0.15b	0.30±0.07	0.25±0.04
T组	0.65±0.14c	0.55±0.10c	0.71±0.11c	0.78±0.10c	0.67±0.13c	0.43±0.11c	0.42±0.09c
T+R1组	0.43±0.08c	0.40±0.08c	0.55±0.06c	0.65±0.09c	0.41±0.08c	0.59±0.12c	0.64±0.11c
T+R2组	0.41±0.07c	0.38±0.09c	0.53±0.05c	0.63±0.10c	0.42±0.07c	0.58±0.08c	0.59±0.15c
T+R1+R2组	0.26±0.09ce	0.20±0.06ce	0.28±0.06ce	0.48±0.06ce	0.28±0.04ce	0.72±0.14ce	0.76±0.15ce

^bP<0.01 vs N组;

^cP<0.05 vs M组;

^eP<0.05 vs T组.

表5 免疫组织化学测定不同siRNA干预后肝组织中各项指标的蛋白表达 (mean±SD)

分组	α-SMA	COL-1	COL-3	TGF-β1	Smad3	PCNA	TGF-α
N组	29.3±9.1	62.1±14.9	80.7±17.2	44.9±12.3	65.6±11.6	73.5±11.6	65.9±13.7
M组	634.7±33.9b	457.4±31.7b	515.2±31.3b	589.1±38.9b	482.9±31.2b	79.6±12.4	74.7±15.9
T组	489.4±24.5c	321.8±21.6c	386.9±26.7c	434.8±31.0c	367.1±27.6c	347.5±25.1c	343.2±25.7c
T+R1组	401.6±17.8c	225.2±16.9c	302.4±22.7	343.8±25.0c	282.7±23.1c	436.8±26.2c	429.6±26.1c
T+R2组	394.5±16.2c	237.7±15.9c	298.3±21.3c	361.4±24.7c	286.0±22.1c	431.8±23.6c	446.3±23.3c
T+R1+R2组 e	297.1±13.5c	151.4±12.6ce	214.5±19.5ce	285.6±22.1ce	205.7±16.8ce	501.3±22.9ce	512.5±21.7ce

^bP<0.01 vs N组;

^cP<0.05 vs M组;

^eP<0.05 vs T组.