RNA干扰对乙型肝炎病毒复制的体外影响

表1 RNA干扰质粒对HBV基因表达和核心颗粒DNA水平的影响(mean±SD, %)

试验组	复孔数	HBsAg相对水平1	HBeAg相对水平1	核心颗粒DNA荧光定量PCR检测结果相对水平2
Neg	4	100.0±21.7	100.0±4.7	100.0±10.6
154i	4	80.3±9.3	82.8±6.5	86.0±9.1
312i	4	38.8±1.8b	41.0±5.9b	21.3±1.1b
734i	4	56.3±11.4	54.0±9.2	86.8±18.3

¹干扰质粒对pHBV3.8表达HBsAg、HBeAg的影响 使用1 μg干扰质粒(154i, 312i, 734i)以及阴性对照(Neg)分别与0.2 μg pHBV3.8共转染Huh-7, 并同时转染20 ng pRL以标化转染效率, 48 h后使用ELISA方法测定培养细胞上清中HBsAg和HBeAg的值, 并测定细胞中R-Luc活性标化转染效率.

²核心颗粒DNA荧光定量PCR检测结果 使用2 μg干扰质粒(154i, 312i, 734i)以及阴性对照(Neg)分别与0.4 μg pHBV3.8共转染Huh-7, 并同时转染40 ng pRL以标化转染效率, 48 h后收获细胞抽提HBV核心颗粒DNA并测定细胞中R-Luc活性标化转染效率, 使用荧光定量PCR测定细胞内的HBV核心颗粒DNA.

^bP<0.01 vs Neg组.

表2 HBV核心颗粒DNA Southern杂交条带定量比较与HBV RNA Nouthern杂交条带定量比较结果(%)

试验组	Southern杂交条带定量相对光密度值1	Northern杂交条带定量相对光密度值2
Neg	100.0	100.0
154i	48.3	95.3
312i	10.5	12.0
734i	34.7	42.9

¹ HBV核心颗粒DNA Southern杂交条带定量比较结果 我们将Southern印迹的结果扫描入电脑. 使用Gel-Pro Analyzer软件对图像的各个泳道进行密度扫描. 将扫描得到的密度值以Neg组作为100%进行标化. 结果为相对光密度值, 并以Neg组为100%进行标准化.

² HBV RNA Nouthern杂交条带定量比较结果 我们将Nouthern印迹的结果扫描入电脑. 使用Gel-Pro Analyzer软件对图像的各个泳道进行密度扫描. 将扫描得到的密度值以Neg组作为100%进行标化. 结果为相对光密度值, 并以Neg组为100%进行标准化.