LincRNA-p21调控PI3K/AKT信号通路逆转结肠癌细胞伊立替康耐药性

图1 通过CCK-8法对构建的CPT-11耐药细胞进行鉴定(n = 4). A: 鉴定HCT-8/CPT-11细胞, 与HCT-8细胞比较, ^aP = 0.003; B: 鉴定SW480/CPT-11细胞, 与SW480细胞比较, ^bP = 0.000. CCK-8: 细胞计数试剂盒-8; CPT-11: 伊立替康.

图2 RT-qPCR检测CPT-11耐药细胞中lincRNA-p21的表达(n = 3). A: lincRNA-p21在HCT-8细胞和HCT-8/CPT-11细胞中的表达, 与HCT-8细胞比较, ^aP = 0.005; B: lincRNA-p21在SW480细胞和SW480/CPT-11细胞中的表达, 与SW480细胞比较, ^bP = 0.000. RT-qPCR: 实时定量聚合酶链式反应; CPT-11: 伊立替康; lincRNA-p21: 长链基因间非编码RNA-p21.

图3 LincRNA-p21敲低增强CPT-11耐药细胞对CPT-11耐药性(n = 4). A: RT-qPCR鉴定si-lincRNA-p21在HCT-8/CPT-11细胞中转染效率, 与si-NC组比较, ^aP = 0.000; B: si-lincRNA-p21转染后, HCT-8/CPT-11细胞在不同剂量的CPT-11处理24 h下的细胞活性, 与si-NC组比较, ^bP = 0.023, ^cP = 0.006, ^dP = 0.000; C: RT-qPCR鉴定si-lincRNA-p21在SW480/CPT-11细胞中转染效率, 与si-NC组比较, ^eP = 0.000; D: si-lincRNA-p21转染后, SW480/CPT-11细胞在不同剂量的CPT-11处理24 h下的细胞活性, 与si-NC组比较, ^fP = 0.032, ^gP = 0.015, ^hP = 0.000. lincRNA-p21: 长链基因间非编码RNA-p21; CPT-11: 伊立替康; RT-qPCR: 实时定量聚合酶链式反应.

图4 LincRNA-p21过表达抑制CPT-11耐药细胞对CPT-11耐药性(n = 4). A: RT-qPCR鉴定pcDNA-lincRNA-p21在HCT-8/CPT-11细胞中的转染效率, 与pcDNA-vector组比较, ^aP = 0.000; B: pcDNA-lincRNA-p21转染后, HCT-8/CPT-11细胞在不同剂量的CPT-11处理24 h下的细胞活性, 与pcDNA-vector组比较, ^bP = 0.000; C: RT-qPCR鉴定pcDNA-lincrna-p21在SW480/CPT-11细胞中的转染效率, 与pcDNA-vector组比较, ^cP = 0.000; D: pcDNA-lincRNA-p21转染后, SW480/CPT-11细胞在不同剂量的CPT-11处理24 h下的细胞活性, 与pcDNA-vector组比较, ^dP = 0.000. lincRNA-p21: 长链基因间非编码RNA-p21; CPT-11: 伊立替康; RT-qPCR: 实时定量聚合酶链式反应.

图5 LincRNA-p21对PI3K/AKT通路的调控作用(n = 3). A: si-lincRNA-p21转染后, Western blot检测HCT-8/CPT-11细胞中p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的蛋白表达, 与si-NC组比较, ^aP = 0.000, ^bP = 0.002; B: si-lincRNA-p21转染后, Western blot检测SW480/CPT-11细胞中p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的蛋白表达, 与si-NC组比较, ^cP = 0.000, ^dP = 0.015; C: pcDNA-lincRNA-p21转染后, Western blot检测HCT-8/CPT-11细胞中p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的蛋白表达, 与pcDNA-vector组比较, ^eP = 0.006, ^fP = 0.003; D: pcDNA-lincRNA-p21转染后, Western blot检测SW480/CPT-11细胞中p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的蛋白表达, 与pcDNA-vector组比较, ^gP = 0.004, ^hP = 0.001. lincRNA-p21: 长链基因间非编码RNA-p21; CPT-11: 伊立替康; PI3K: 磷脂酰肌醇3-激酶; p-PI3K: 磷酸化PI3K; AKT: 蛋白激酶B; p-AKT: 磷酸化AKT.

图6 LY294002和Recilisib对敲减或过表达lincRNA-p21的CPT-11耐药细胞PI3K/AKT信号活性的影响(n = 3). A和B：LY294002预处理已转染si-lincRNA-p21的HCT-8/CPT-11(A)和SW480/CPT-11(B)细胞后, Western blot检测p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的蛋白表达; C和D: Recilisib预处理已转染pcDNA-lincRNA-p21的HCT-8/CPT-11(C)和SW480/CPT-11(D)细胞后, Western blot检测p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的蛋白表达. LY294002: PI3K/AKT抑制剂; Recilisib: PI3K/AKT激动剂; lincRNA-p21: 长链基因间非编码RNA-p21; CPT-11: 伊立替康; PI3K: 磷脂酰肌醇3-激酶; p-PI3K: 磷酸化PI3K; AKT: 蛋白激酶B; p-AKT: 磷酸化AKT.

图7 PI3K/AKT信号通路参与lincRNA-p21对CPT-11耐药性的调节作用(n = 3). A: LY294002预处理已转染si-lincRNA-p21的HCT-8/CPT-11细胞后, 检测在不同剂量的CPT-11处理24 h下的细胞活性, 与si-lincRNA-p21组比较, ^aP = 0.000, ^bP = 0.015, ^cP = 0.000; B: LY294002预处理已转染si-lincRNA-p21的SW480/CPT-11细胞后,检测在不同剂量的CPT-11处理24 h下的细胞活性, 与si-lincRNA-p21比较, ^dP = 0.034, ^bP = 0.008, ^fP = 0.000; C: Recilisib预处理已转染pcDNA-lincRNA-p21的HCT-8/CPT-11细胞后, 检测在不同剂量的CPT-11处理24 h下的细胞活性, 与pcDNA-lincRNA-p21组比较, ^gP = 0.000; D: Recilisib预处理已转染pcDNA-lincRNA-p21的SW480/CPT-11细胞后, 检测在不同剂量的CPT-11处理24 h下的细胞活性, 与pcDNA-lincRNA-p21组比较, ^hP = 0.000. LY294002: PI3K/AKT抑制剂; Recilisib: PI3K/AKT激动剂; lincRNA-p21: 长链基因间非编码RNA-p21; CPT-11: 伊立替康; PI3K: 磷脂酰肌醇3-激酶; AKT: 蛋白激酶B.