大鼠早期生活应激对成年后功能性慢性内脏痛及下丘脑室旁核内CRH R1表达的影响

图1 大鼠功能性慢性内脏痛模型建立时间流程图. 大鼠出生后第2天到第14天母婴分离或出生后第8、10、12天直结肠扩张, 出生后第8周到第10周行为学测定, 出生后第3个月处死并取材.

图2 大鼠早期母婴分离或直结肠扩张对成年后AWR评分的影响. A: 各组大鼠在20 mmHg直结肠扩张压力刺激下AWR评分; B: 各组大鼠在40 mmHg直结肠扩张压力刺激下AWR评分; C: 各组大鼠在60 mmHg直结肠扩张压力刺激下AWR评分; D: 各组大鼠在80 mmHg直结肠扩张压力刺激下AWR评分. 该箱图中箱体代表四分位距, 中间黑线代表中位数, 上下短线代表5%到95%的可信区间. ^aP<0.05 vs 雄性对照组; ^cP<0.05 vs 雌性对照组; ^eP<0.05 vs 雄性母婴分离组; ^gP<0.05 vs 雌性母婴分离组; ⁱP<0.05 vs 雄性直结肠扩张组. MC: 雄性对照组; FC: 雌性对照组; MS: 雄性分离组; FS: 雌性分离组; MD: 雄性扩张组; FD: 雌性扩张组.

图3 大鼠早期母婴分离或直结肠扩张对成年后痛阈值的影响. 各组大鼠成年后痛阈值的比较. ^aP<0.05 vs 雄性对照组; ^eP<0.05 vs 雄性母婴分离组.

图4 大鼠早期母婴分离或直结肠扩张对成年后腹外斜肌放电幅度的影响. A: 各组大鼠在20 mmHg直结肠扩张压力刺激下腹外斜肌放电幅度; B: 各组大鼠在40 mmHg直结肠扩张压力刺激下腹外斜肌放电幅度; C: 各组大鼠在60 mmHg直结肠扩张压力刺激下腹外斜肌放电幅度; D: 各组大鼠在80 mmHg直结肠扩张压力刺激下腹外斜肌放电幅度; E: 随着刺激强度的逐渐增加各组大鼠腹外斜肌放电幅度变化; F: 雄性扩张组大鼠在不同的压力梯度(20、40、60、80 mmHg)直结肠扩张刺激下腹外斜肌放电幅度情况. ^aP<0.05 vs 雄性对照组; ^cP<0.05 vs 雌性对照组; ^eP<0.05 vs 雄性母婴分离组; ^gP<0.05 vs 雌性母婴分离组. MC: 雄性对照组; FC: 雌性对照组; MS: 雄性分离组; FS: 雌性分离组; MD: 雄性扩张组; FD: 雌性扩张组.

图5 大鼠早期母婴分离或直结肠扩张成年后结肠组织大体和病理观. A-F: 各组大鼠成年后结肠组织大体观; G-L: 各组大鼠成年后结肠组织病理观. A, G: MC; B, H: FC; C, I: MS; D, J: FS; E, K: MD; F, L: FD. MC: 雄性对照组; FC: 雌性对照组; MS: 雄性分离组; FS: 雌性分离组; MD: 雄性扩张组; FD: 雌性扩张组.

图6 大鼠下丘脑室旁核内微量注射利多卡因后腹外斜肌放电幅度变化. A: 各组大鼠PVN内微量注射利多卡因后10、20、30 min在60 mmHg直结肠扩张压力刺激下腹外斜肌放电幅度比较; B: 根据Paxinos和Watson的大鼠脑立体定位图谱定位PVN; C: 中性红染色定位PVN. C: 对照组; NS: 生理盐水组; LD: 利多卡因组. ^cP<0.05 vs 给药前. PVN: 下丘脑室旁核.

图7 大鼠早期母婴分离或直结肠扩张成年后下丘脑室旁核内CRH R1蛋白表达变化. A: 免疫印迹分析各组大鼠PVN内CRH R1的蛋白表达, 上面条带为CRH R1, 下面条带为β-actin. ^aP<0.05 vs 雄性对照组; ^cP<0.05 vs 雌性对照组. B-G: 免疫荧光分析雄性各组大鼠PVN内CRH R1的蛋白表达; B: MC; C, E: MS; D, F: MD. ^aP<0.05 vs 雄性对照组; ^cP<0.05 vs 雄性分离组. MC: 雄性对照组; FC: 雌性对照组; MS: 雄性分离组; FS: 雌性分离组; MD: 雄性扩张组; FD: 雌性扩张组. PVN: 下丘脑室旁核; CRH R1: 促肾上腺皮质激素释放激素受体1; NMS: 新生期母婴分离; CRD: 新生期直结肠扩张.

图8 大鼠早期母婴分离或直结肠扩张成年后下丘脑室旁核内c-fos表达变化. A: MC; B: MS; C: MD. D: 雄性各组大鼠PVN内c-fos蛋白表达. ^aP<0.05 vs 雄性对照组. MC: 雄性对照组; MS: 雄性分离组; MD: 雄性扩张组.