持续释放人血管抑素的基因修饰化工程细胞hE/293细胞株的建立

图1 重组质粒pSNAV2. 0-hEndostatin的双酶切鉴定结果. M1: DL15000(TaKaRa, 上样量5 μL, 条带大小分别为15 000, 10 000, 7500, 5000, 2500, 1000和250 bp); M2: DL2000(TaKaRa, 上样量5 μL, 条带大小分别为2000, 1000, 750, 500, 250和100 bp); 1: pSNAV2.0-hEndostatin质粒; 2: BglⅡ+EcoRⅠ双酶切pSNAV2.0-hEndostatin质粒.

图2 重组质粒pSNAV2. 0-hEndostatin的PCR鉴定结果. M: DL2000(TaKaRa, 上样量5 μL, 条带大小分别为2000, 1000, 750, 500, 250和100 bp); 1: 以pSNAV2.0-hEndostatin质粒为模板的PCR产物; 2: 阴性对照; 3: 以pAVV-hEndostatin质粒为模板的PCR产物.

图3 重组质粒pSNAV2. 0-hEndostatin的测序结果.

图4 G418筛选后稳定表达ES的hE/293细胞(×200).

图5 阳性克隆细胞培养上清中ES蛋白的Western blot分析结果. 1: 4号克隆; 2: 5号克隆; 3: 8号克隆; 4: 5号克隆培养30 d.

图6 ECV304细胞生长抑制试验(72 h). A: HEK293组(×200); B: hE/293组(×200).

图7 浓缩的hE/293细胞分泌上清抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管(CAM)生成. A: HEK293组; B: hE/293组.