人自身抗原CYP2D6 285 bp基因片段克隆、真核表达及免疫性鉴定

图1 CYP2D6基因目的片段PCR扩增产物电泳图. 1: 目的基因片段; 2-5: 其他基因片段; 6: 1 kb DNA ladder (100, 200, 300, 400, 500, 1000, 1500, 1600 bp).

图2 转化阳性克隆的菌落照片. 白色菌落: 转化阳性克隆经过30℃培养48 h, 得到直径1-2 mm的单克隆菌落.

图3 pEGH-CYP2D6重组质粒PCR电泳图. A-H: 质粒PCR扩增产物; C: 目的基因片段与载体pEGH重组正确的PCR扩增产物; M: 1 kb DNA ladder (100, 200, 300, 400, 500, 1000, 1500, 1600 bp).

图4 GST-CYP2D6显性表位融合蛋白的SDS-PAGE. M: 蛋白质Mr标准(14 400, 20 000, 28 500, 35 000, 45 000, 66 200, 94 000); 1: 目的基因片段与GST(Mr 26 800)基因融合表达的纯化后蛋白质(Mr 37 300), 目的蛋白Mr 大小为10 500, 融合蛋白Mr大小为37 300.

图5 融合蛋白的WB. 1: 含pEGH空载体的酿酒酵母Y258菌液半乳糖诱导纯化; 2: 含pEGH-CYP2D6重组质粒的酿酒酵母Y258菌液半乳糖诱导纯化后, 在相应37 000出现单一条带; M: 蛋白质标准带.