改良聚合酶链反应检测HBV共价闭合环状DNA

图1 HBV rcDNA、cccDNA、引物位置及MBN作用位点. A: HBV rcDNA正链为不完整外环, 负链为完整内环 B: HBV cccDNA内外环均完整, 无MBN作用位点. MBN切割位点单链区和三链区以粗箭头和虚线表示; cccDNA特异性引物为单箭头, CCC1A/CCC1B和CCC2A/CCC2B分别为2对引物; 非特异性引物为双箭头, RC1A/RC1B和RC2A/RC2B分别为2对引物. DR1: 直接重复序列1; DR2: 直接重复序列2.

图2 非特异性引物RC2A／RC2B和RC1A／RC1B分别扩增不同数量的HBV rcDNA及HBV基因组质粒模板电泳图. M: ΦX174 DNA/Hae Ⅲ相对分子质量标准; 10⁶-10: PCR体系中分别加入10⁶-10个模板分子.

图3 特异性引物CCC1A／CCC1B和CCC2A／CCC2B分别扩增不同数量的HBV rcDNA及HBV基因组质粒模板电泳图. M1: 1kb DNA ladder; M2: ΦX174 DNA/HAE Ⅲ相对分子质量标准; 10⁶-10: PCR体系中分别加入10⁶-10个模板分子板分子.

图4 不同数量HBV cccDNA和rcDNA模板经MBN消化后以非特异性引物RC1A／RC1B和特异性引物CCC1A/CCC1B进行PCR扩增后电泳图. 垂直黑色虚线左半部分为HBV cccDNA模板样品, 数量为10⁵-10²; 垂直黑色虚线右半部分为HBV rcDNA模板样品, 数量为105-102. M1: 1kb DNA ladder; M2: ΦX174 DNA/HAE Ⅲ相对分子质量标准; U: 未经MBN消化的样品; D: 经过MBN消化的样品.