修回日期: 2020-05-07
接受日期: 2020-05-14
在线出版日期: 2020-06-08
近年来, 直肠癌(rectal cancer, RC)发病率与死亡率逐年上升, 已严重威胁人类生命安全, 目前RC发生及发展的分子机制尚未完全阐明. 目前临床主要采用手术与放化疗结合等方式进行治疗, 患者预后很差. 随着生物技术的发展, 分子靶向治疗逐渐成为RC等肿瘤的新型治疗手段, 但关于RC靶向治疗的潜在作用靶点尚未完全阐明.
长链非编码RNA (long non-coding RNA, lncRNA)在RC等肿瘤中表达异常, 但关于其具体作用机制尚未完全阐明, lncRNA主要通过靶向调控miRNA表达而调控其靶基因表达从而调控肿瘤细胞增殖及凋亡等生物学过程, 已有研究显示lncRNA DCST1-AS1在肿瘤发生及发展过程中发挥癌基因作用, 但其在RC中的表达及其作用机制尚未阐明.
本研究主要探究lncRNA DCST1-AS1在RC中的表达及其对miR-874-3p的靶向调控作用, 为进一步揭示RC发病机制奠定实验基础, 以期为RC的靶向治疗提供潜在的靶点.
采用实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测RC组织及细胞中lncRNA DCST1-AS1与miR-874-3p的表达; 采用脂质体转染技术分别将si-NC、si-DCST1-AS1、miR-NC、miR-874-3p mimics、si-DCST1-AS1与anti-miR-NC、si-DCST1-AS1与anti-miR-874-3p转染至RC细胞; 采用MTT法检测细胞增殖; 采用流式细胞术检测细胞凋亡率; 采用Western blot法检测细胞增殖及凋亡相关蛋白表达; 采用双荧光素酶报告实验验证lncRNA DCST1-AS1和miR-874-3p的靶向关系.
lncRNA DCST1-AS1在RC组织及细胞中呈高表达, 而miR-874-3p呈低表达; 干扰lncRNA DCST1-AS1表达或miR-874-3p过表达可显著抑制RC细胞增殖, 促进细胞凋亡, 并可促进p21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白表达及抑制细胞周期蛋白1、B淋巴细胞瘤-2表达; lncRNA DCST1-AS1可靶向结合miR-874-3p, 并可负向调控miR-874-3p的表达; 干扰miR-874-3p表达与干扰lncRNA DCST1-AS1表达共同处理可显著减弱干扰lncRNA DCST1-AS1表达对RC细胞增殖及凋亡的作用.
本研究发现lncRNA DCST1-AS1在RC细胞中表达水平升高, miR-874-3p的表达水平降低; 本研究提出干扰lncRNA DCST1-AS1表达可能通过靶向上调miR-874-3p的表达从而抑制RC细胞增殖及促进细胞凋亡; 本研究结果可为RC的靶向治疗提供新方向, lncRNA DCST1-AS1可能作为RC治疗的潜在靶点.
本研究将继续探究miR-874-3p下游靶基因表达, 并分析lncRNA DCST1-AS1-miR-874-3p-靶mRNA分子轴在RC发生及发展过程中的作用机制; 本研究将进一步采用体内动物实验验证lncRNA DCST1-AS1-miR-874-3p-靶mRNA分子轴在RC发病中的作用机制.