修回日期: 2019-04-28
接受日期: 2019-06-10
在线出版日期: 2019-06-28
急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)病因较多且机制较为复杂, 并发症较多, 根据其严重程度主要分为轻型AP和重症AP. 轻型经治疗后恢复较好, 但重症AP早期症状不典型, 且发展迅速, 后期恶化严重可导致多器官功能衰竭, 致死率高. 早诊断重症AP, 及时治疗, 提高治愈率是现阶段临床工作的重点. 我国目前AP主要病因胆道疾病, 高脂血症, 过度酒精, 暴饮暴食等. 治疗方式有内科治疗和手术治疗. 而要准确、恰当、及时的治疗需要对其机制更为了解, 腺泡细胞死亡方式是AP的研究的一个重点, 主要包括凋亡、坏死、程序性凋亡、自噬和焦亡等, 部分研究证明腺泡细胞死亡方式影响AP病情转归, 凋亡能减轻炎症反应, 而坏死加重炎症反应. 而本文主要是从miRNA方面研究其对AP凋亡的影响及其可能的作用机制. 从一个更小的分子层面进行研究以期为以后的临床治疗提供理论基础和依据.
本研究的主题是miRNA-7对AP增殖凋亡的影响, 拟解决的关键问题是了解miRNA-7是如何影响AP细胞的增殖和凋亡, 以及其和特异性蛋白3(specific protein 3, Sp3)之间的关系及他们对AP的影响, 拓展AP的发生发展机制, 为以后临床上的诊断治疗等提供新思路和依据.
研究的主要目标即miRNA-7, Sp3, AP之间的联系, 研究得到miRNA-7和Sp3均在AP中异常表达, 敲减miRNA-7和过表达Sp3均可抑制雨蛙素处理AR42J细胞凋亡, 且miR-7靶向负调控Sp3. 可以从调控AP凋亡的途径来调控其进展, 为其治疗提供新思路.
本研究首先是用雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡来构建AP的模型, 通过ELISA法检测淀粉酶(amylase, AMY)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的水平变化检验模型构建成功. 转染miRNA-7和Sp3的过表达和抑制表达载体质粒, 通过流式细胞术检测细胞凋亡, Western blot检测Sp3蛋白表达, qRT-PCR检测miRNA-7和Sp3 mRNA表达水平, 荧光素酶报告基因检测实验检测miR-7与Sp3之间的靶向关系.
本实验的结果是在雨蛙素构建的AP模型细胞中, miR-7的表达水平显著升高; Sp3的表达水平显著降低(P<0.01). 敲减miR-7、过表达Sp3腺泡细胞凋亡率降低. miR-7靶向负调控Sp3; 抑制Sp3表达逆转了敲减miR-7对雨蛙素处理AR42J细胞的凋亡抑制作用. 达到了本实验的目的, 对该领域AP的发病进展机制又多了一份理论依据. 以后可以进一步从临床方面进行应用.
miR-7靶向负调控Sp3; 敲减miR-7、过表达Sp3抑制腺泡细胞凋亡. 可以通过调控miR-7影响AP的进展. 从miRNA角度去研究其对AP的影响拓宽了研究的范围, 可更深层次多角度的去了解AP.
本研究仅是在实验的小鼠上进行研究, 有一定的局限性, 仅限于理论层面, 对于到人的影响还有一定的距离. 本研究未来研究的方向是进一步深入的研究调控miR-7和Sp3对治疗AP小鼠的影响及其可能会产生的现象等. 最佳方法是寻找更接近于真实AP的小鼠或者与人AP更为相似的受体.