100023 北京市2345信箱 世界华人消化杂志  2001年10月15日;9(10):1110-1115
Email: wcjd@public.bta.net.cn 世界华人消化杂志  ISSN 1009-3079  CN  14-1260/R
http:// www.wjgnet.com 版权归世界胃肠病学杂志社

⊙研究原著⊙

电针对LPS干预大鼠胃排空功能的影响及与血清细胞因子的关系

李艳梅 黄裕新 张靖 王庆莉

中国人民解放军第四军医大学唐都医院消化内科 陕西省西安市 7100 38
李艳梅, 女, 1973-09-23生, 山西省永济市人, 汉族, 1996年毕业于第四军 医大学临床医学系,
现在第四军医大学攻读内科学硕士学位, 住院医师, 助教.
国家自然科学基金资助项目， No. 39970888
项目负责人 黄裕新，中国人民解放军第四军医大学唐都医院消化内 科，陕西省西安市新寺路  710038.liyanmei1999@263.net
Telephone: 86-29-3577597, 3577721
收稿日期 2001-07-19 接受日期 2001-08-01


Effect of electro-acupuncture on gastric emptying of rats treated wit h lipopolysaccharide and its relationship with serum cytokines

Yan-Mei Li,Yu-Xin Huang,Jing Zhang and Qing-Li Wan g
Department of Gastroenterology, Tangdu Hospital, 4th Military  Medical University, Xi'an 710038, Shaanxi Province, China
Supported by the National Natural Science Foundation of China, N o. 39970888
Correspondence to: Dr. Yan Mei Li, Department of Gastroenterolog y, Tangdu Hospital, 4th Military Medical University, Xi'an 710038, Shanxi Provin ce, China liyanmei1999@263.net
Received 2001-07-19 Accepted 2001-08-01


Abstract
AIM To investigate the regulatory effects of electro-acupun cture (EA) at Tsusanli (St36) on gastric emptying of rats treated with lipopolys accharide and the relationship with the changes of serum cytokines and nitric ox ide (NO) levels.

METHODS  Sixty male SD rats were randomly divided into 6 groups as following normal control group; LPS group; LPS+non-acupoint group; LPS+Tsusa nli 5d group; LPS+Tsusanli 3d group; LPS+Tsusanli 1d group. LPS (2.5mg·kg- 1 body mass, from E. coli) wasadministered intraperitoneally to rats. Gas tric emptying of liquids was evaluated by the phenol red method in conscious animals. Circulating levels of TNF-α, IL-1β,IL-6 were determined by radioimm unoassay (RIA). Serum NO was examined by the method of nitrate reductase.

RESULTS Gastric emptying of non-nutrient liquids was markedly retarded(73.2%±3.1% vs 15.4%±5.3%, P<0.01 vs normal control group)  and serum TNF-α(ng·L-1), IL-1β(ng·L-1), IL-6 (ng·L-1 )and NO(umol·L-1) levels were elevated significantly by LPS treatment  (575.0±35.5 vs 731.3±35.2; 118.6±15.5 vs 187.1±10.4; 94.7±15.0 v s 157.4±20.6; 32.9±2.9 vs 100.2±5.9, P<0.01 vs normal control g roup). After EA at Tsusanli, there was a significant up-regulation of gastric e mptying (15.4%±5.3% vs 31.7%±4.4%, P<0.05) and down-regulation of ser um TNF-α, IL-6 and NO (731.3±35.2 vs 531.4±15.8; 157.4±20.6 vs 66. 6±8.5; 100.2±5.9 vs 71.2±5.7, P<0.01) compared with that of the LPS g roup. No significant difference was observed among the Tsusanli 5d, 3d and 1d gr oups. As for IL-1β, it decreased significantly (187.1±10.4 vs 137.5±7. 7, P<0.05) after EA at Tsusanli for 5d and 3d, while there was little change  after 1d. EA at non-acupoint had no effect on gastric emptying and serum TNF- α, IL-1β, but caused a decrease in serum IL-6, though this effect was weaker than that of EA at Tsusanli.

CONCLUSIONS EA at Tsusanli can accelerate the retarded gastric emptying of liquids inhibited by LPS. This effect may be associated with the mod ulation of EA on serum proinflammatory cytokines induced by LPS. Better effects were seen in EA at Tsusanli for 5d and 3d than for 1d.

Subject headings Gastric emptying; Stomach meridian;  Electroacupuncture; Cytokines/blood; Lipopolysaccharides

Li YM,Huang YX,Zhang J，Wang QL.Effect of electro-acupuncture on gastr ic emptying of rats treated with lipopolysaccharide and its relation with serum cytokines.Shjie Huaren Xiaohua Zazhi,2001；9(10)：1110-1115


摘 要
目的 初步探讨电针足三里穴对于细菌脂多糖(LPS)干预下的大鼠胃排 空功能的影响及与血清细胞因子、一氧化氮（NO）的关系.

方法 将大鼠随机分成正常对照组、LPS干预组、LPS+非穴组（非经非穴5 d）、LPS+针穴5d组（足三里穴）、LPS+针穴3d组、LPS+针穴1d组. 给予大鼠LPS 2.5mg·kg -1腹腔注射, 以酚红法测量胃液体排空功能, 采用放射免疫分析法(RIA)检测大鼠血 清肿瘤坏死因子-alpha（TNF-α）、白介素-1beta（IL-1β）、白介素-6（IL-6）含 量. 采用硝酸还原酶法检测血清NO浓度.

结果 与正常对照组相比, LPS干预后, 大鼠胃内非营养液体排空率明显 下降(73.2%±3.1% vs 15.4%±5.3%, P<0.01), 血清TNF-α（ng·L-1）,  IL-1β（ng·L-1）, IL-6（ng·L-1）及NO（μmol·L-1）水 平明显升 高(分别为575.0±35.5 vs 731.3±35.2; 118.6±15.5 vs 187.1±10.4; 94.7±1 5.0 vs 157.4±20.6; 32.9±2.9 vs 100.2±5.9, P均<0.01). 电针足三里穴 后与LPS干预组相比, 胃排空率显著增加(15.4%±5.3% vs 31.7%±4.4%, P<0.0 5), 但仍明显低于正常对照组(73.2%±3.1%, P<0.05). 血清TNF-α, IL-6及NO水平显著下降（分别为731.3±35.2 vs 531.4±15.8, P<0.01; 157.4±20.6 vs 6 6.6±8.5, P<0.01; 100.2±5.9 vs 71.2±5.7, P<0.05）, 且电针5d, 3d, 1 d三个时段之间无明显差异. 与LPS干预组相比, 电针足三里穴5d或3d也可使血清IL-1β含 量明显下降（187.1±10.4 vs 137.5±7.7, P<0.05）, 但电针1d对其无明显影响.  非经非穴刺激对胃排空率、血清TNF-α, IL-1β, NO水平无显著影响. 但可使血清IL-6 水平下降, 不过其作用弱于电针足三里组.

结论 电针足三里穴可使LPS所抑制的胃液体排空功能得到明显逆转, 这 种作用机制可能与电针降低LPS诱导下血清前炎性细胞因子及NO的水平有关系. 电针足三里 穴5d, 3d较1d 作用更显著.

主题词 胃排空/针灸效应；胃经/针灸效应; 电针；细胞活素类/血 液; 脂多糖类

李艳梅，黄裕新，张靖，王庆莉.电针对LPS干预大鼠胃排空功能的影响及与血清细胞因子的关系.
世界华人消化杂志，2001；9(10)：1110-1115


0 引言
革兰阴性细菌内毒素血症患者 往往出现食欲减退、恶心、呕吐、腹胀等消化道症状. 脂多糖(LPS)是内毒素的主要成分, 动物实验表明LPS能够延缓胃排空［1-5], 此作用与LPS诱导下前炎性细胞因子及NO 的升高有关, 迷走神经背丛(DVC)在其中可能起重要作用［3]. 针刺足阳明胃经能够 调整胃运动功能［6-9,11,12], 表现为良性的双向调整作用, 而针刺足三里穴对机 体免疫功能也有影响［13-18]. 我们采用LPS干预大鼠, 观察大鼠胃排空功能及血 清前炎性细胞因子、NO的变化情况, 进而用电针刺激足三里穴, 探索电针对这些因 素是否有调整作用,旨在丰富针灸效应的理论基础, 并力求为针刺治疗相关疾病提供科学依 据.

1  材料和方法
1.1 材料 健康成年雄性SD大鼠60只(由本校实验动物研究中心提供), 体质量180～220g.放免试剂盒由解放军总医院科技开发中心提供, NO试剂盒 由 南京建成生物工程研究所提供. LPS由Sigma公司提供(血清型: 0111:B4, 从大肠埃希杆菌提 取), G6805-A型电针治疗仪由上海医疗仪器厂生产, 752C型紫外可见分光光度计由上海第 三分析仪器厂制造.
1.2 方法 所有大鼠均在安静环境下饲养, 自由进食水,  实验前禁食24h, 禁水3h. 将大鼠随机分为6组, 每组10只. 设正常对照组、LPS干预组、LPS+非穴组（5d）、LPS+针穴5d组、LPS+针穴3d组、LPS+针穴1d组. 观察主穴选取双侧足三里 穴, 即大鼠后肢腓骨小头外下0.5cm处, 电针参数为疏密波, 频率2Hz, 强度2V, 以大鼠双下 肢轻微抖动为宜. 非经非穴点选取足三里穴向后0.5cm处, 参数与足三里穴相同. 每天将大 鼠固定于特制的有机玻璃笼内, 连续刺激双侧足三里穴或非经非穴点30min, 持续5d, 3d或1 d. 正常对照组及LPS干预组大鼠在每天同一时辰固定30min, 但不行针刺. LPS干预方法: 以 无菌生理盐水将LPS配成2.5g·L-1浓度, 在最后1d电针之前将大鼠腹壁消毒, 按2. 5mg·kg-1腹腔注射LPS, 正常对照组用同样剂量无菌生理盐水代替.
1.2.1 胃排空测定 采用酚红法［5,21,23-27] ，将50 mg酚红溶于15g·L-1甲基纤维素100 mL中, 充分搅拌, 制成液体试餐. LPS 腹 腔注射后给予大鼠电针刺激或单纯固定30min. LPS注射2h后用灌注针头经口胃内灌注试餐1. 5mg, 1h后乙醚吸入麻醉, 断头处死大鼠, 剖腹, 结扎胃幽门及贲门, 取出胃. 以0.1mol·L-1 NaOH 100mL作匀浆介质制匀浆, 室温放置1h后, 取上清5mL加入200 g·L- 1三氯醋酸溶液0.5mL, 离心, 将上清加入0.5mol·L-1 NaOH 4 mL中, 在分光光 度计 上560nm处读数, 作为胃内酚红剂量. 每组取2只大鼠, 灌注试餐后立即处死, 测胃内酚红剂 量作为零排空点的标准剂量. 计算公式：胃排空率(%)=(1-每组胃内酚红平均剂量/本组标准剂量)×100%
1.2.2 细胞因子及NO测定 将大鼠断头取血, 分离血清.  按试剂盒要求应用放射免疫分析方法（RIA）测定血清ir-TNF-α, ir-IL-1β,ir-IL -6含量. 以硝酸还原酶法测定血清NO浓度.
    统计学处理 应用SPSS8.0 统计软件进行分析, 数据均以x±s表示, 多组间比较用方差分析.

2  结果
2.1 电针对胃排空功能的影响 腹腔注射LPS 3h后, 大鼠胃液体 排空率由正常对照组的（73.2±3.1）%下降为（15.4±5.3）%（P<0.01表2）, 电针足三里 穴5d使胃排空率明显上升至(31.7±4.4)% (P<0.05 vs LPS组)，但仍明显低于正常 对照组（P<0.05）. 电针5d, 3d或1d三个时段对胃排空率的影响无显著性差异, 而电针非经非穴点5d对胃排空率无明显作用（15.2<3.5）%（P<0.05 vs LPS组）.
2.2 电针对血清细胞因子的影响 LPS诱导血清TNF-α,  IL-1β, IL-6含量明显升高（P<0.01 vs 正常对照组），电针足三里穴5d, 3d 或1d均可使血清TNF-α, IL-6水平显著下降（P<0.01 vs LPS组）, 且三个时段之间无明显差异. 电针足三里穴5d或3d也可使血清IL-1β含量明显下降（P<0.05 vs LPS组）, 但电针1d组对血清IL-1β水平无明显影响. 电针非经非穴点5d后, 血清TNF- α, IL-1β含量无显著变化（P<0.05 vs LPS组）,但使血清IL-6含量降低（P <0.05 vs LPS组）,其作用弱于电针足三里5d及3d组（P<0.05）,但与电针足三 里1d组相比, 无显著差异.
2.3 电针对血清NO的影响 LPS诱导血清NO浓度明显上升 （P<0.01 vs 正常对照组）, 电针足三里穴使其明显下降（P<0.05 vs LP S组）, 且三个时段之间无显著差异, 但仍较正常对照组明显升高（P<0.01）. 电针非 经非穴点对血清NO水平无显著影响（P<0.05 vs LPS组）.
2.4 指标之间的相关性分析 不同处理导致血清NO浓度 及IL-1浓度的变化之间具有显著的正相关性（P<0.01）, 血清NO浓度与胃排空率之间 有显著的负相关（P<0.01）, 血清TNF-α与IL-6