100023 北京市2345信箱 世界华人消化杂志  2000年8月15日;8(8):937-939
Email: wcjd@public.bta.net.cn 世界华人消化杂志  ISSN 1009-3079  CN  14-1260/R
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⊙研究快报⊙

凋亡相关因子Fas/FasL在慢性肝炎、原发性肝癌表达的规律

邵润轩  王江滨  王宵伟

白求恩医科大学第三临床学院中日联谊医院消化内科  吉林省长春市  130031
项目负责人  邵润轩白求恩医科大学第三临床学院中日联谊医院消化内科  吉林省长春市  130031
收稿日期  2000-05-06  接收日期  2000-05-11 


Subject headings  hepatitis; liver neoplasms; Fas ligand; apoptosis; immunohistochemistry; apoptosis associated
factors-Fas and Fas ligand

主题词  肝炎；肝肿瘤；Fas 配体；细胞凋亡；免疫组织化学；凋亡相关因子Fas/Fas L

邵润轩 王江滨 王宵伟. 凋亡相关因子Fas/FasL在慢性肝炎、原发性肝癌表达的规律.  世界华人消化杂志，2000；8(8)：937-939   


当病毒等损伤因素引起细胞损伤或癌变时，将诱导受损细胞及癌变细胞表面表达Fas及Fas L增加［1，2］. 在同一细胞表面过度表达的Fas和FasL可互相结合而启动细胞凋亡，发生细胞自杀（suicide），或相邻的两个细胞间的FasL与Fas结合而诱导细胞凋亡，发生同胞相杀(fratricide). 表达于T淋巴细胞表面的FasL也可与受损及癌变细胞表面的Fas结合，而引起该细胞的凋亡，从而对机体起到免疫监视作用. 这个过程常被认为是机体为维护自身的稳定性的一种自我保护机制［3-12］. 如果Fas及FasL的表达及功能失常将使机体的这种免疫监视失常，而引起不同程度、不同组织中的炎症甚至肿瘤等. 为探讨Fas/FasL介导的细胞凋亡在病毒性肝炎及原发性肝癌的发生、发展中的作用，我们用免疫酶组织化学染色技术观察了Fas和FasL在原发性肝癌组织及肝癌周围的肝炎组织中的表达情况.

1  材料和方法

1.1  材料  取手术切除的正常肝组织30例作对照（其中因肝腺瘤而手术切除的周围正常肝组织3例，因巨大肝血管瘤手术切除的周围正常肝组织6例，因外伤肝破裂而行肝修补术时切除的正常肝组织21例）；取合并有乙型或丙型慢性肝炎的原发性肝癌手术切除癌组织40例，男23例，女17例，年龄27岁～69岁，平均44.6岁，其中乙型肝炎22例，丙型肝炎18例；取明确诊断为慢性乙型或丙型肝炎的肝穿组织45例，男27例，女18例，年龄23岁～65岁，平均42.4岁，其中乙型肝炎24例，丙型肝炎21例.

1.2  方法  用链霉亲合素-生物素化过氧化酶染色方法，同一病例的Fas和FasL的检查用连续切片，在相同条件下进行.试剂兔抗人Fas，FasL多克隆抗体、生物素化羊抗兔抗体、链霉素生物素标记过氧化物酶均为Santacruz公司产品. 结果判定参照Shimizu et al［13］判定标准采用半定量方法，即：分别按染色细胞的分布和染色深度记分. 染色细胞的分布记分标准，0分：无着色细胞；1分：着色细胞数少于整个组织细胞数的1/3, 2分：着色细胞数介于整个组织细胞数的1/3～2/3；3分：着色细胞数超过整个组织细胞数的2/3. 细胞染色的深度记分标准，0分：不着色；1分：染色深度介于0分和2分之间；2分：深染. 然后将染色细胞分布分数和细胞染色深度分数相加，判定试验结果，二者相加分数0分（-）；2分（± ）；3分（+）；4分（++）；5分（+++）.

     统计学处理  采用χ2检验.

2  结果

正常肝组织30例中不表达或仅表达少量Fas,但未见有FasL的表达. 在肝癌组织40例中有13例表达Fas, 阳性率为32%；有30例表达FasL,阳性率为75%. 而且Fas及FasL在肝癌组织中的表达水平也明显高于正常肝组织（P＜0.05，P＜0.001，表1）. 在慢性病毒性肝炎组织中，Fas/FasL的染色阳性率（Fas为91%，FasL为98%）及表达水平均明显高于肝癌组织（P＜0.001，Ρ＜0.025），但Fas/FasL的表达水平及表达阳性率在乙型肝炎和丙型肝炎之间无明显差异（表2）. Fas和FasL在肝癌组织表达中的水平、表达规律包括染色深度染色阳性细胞的分布有相似之处，即在分化较好肝癌组织中呈弥散分布，在分化较差肝癌组织中呈灶性分布，且在癌周围的炎症组织中表达增强，而在癌浸润处表达明显减弱. 在慢性病毒性肝炎组织中Fas以肝细胞质表达为主，细胞膜亦有表达，阳性细胞主要呈弥漫型、灶型、片簇状分布于肝小叶内. FasL主要表达于单核细胞、淋巴细胞的细胞质中，肝细胞核、细胞质、细胞膜亦可见表达. 无论是Fas还是FasL在肝小叶内碎屑、桥样、灶状坏死区及炎症活动明显部位均表达增强；且Fas与FasL表达阳性的肝细胞在组织炎症坏死区附近的分布基本一致.

表1  肝癌及慢性病毒性肝炎组织Fas/FasL表达的比较

表达水平 Fas Fas L
正常肝组织 肝癌组织a 肝炎组织d 正常肝组织 肝癌组织b 肝炎组织c
(n=30) (n=40) (n=45) (n=30) (n=40) (n=45)
+++ 0 2 6 0 5 12
++ 0 5 10 0 7 14
+ 0 4 11 0 11 11
± 2 2 14 0 7 7
- 28 27 4 30 10 1

aχ2=9.97, P＜0.05， bχ2=39.38, P＜0.001,vs 正常肝组织；cχ2=12.32, P＜0.025, dχ2=32.82, P＜0.001,vs 肝癌组织.

表2  乙型与丙型肝炎组织Fas/FasL表达水平的比较

表达水平 Fas Fas L
乙型肝炎 丙型肝炎 乙型肝炎 丙型肝炎
(n=24) (n=21) (n=24) (n=21)
+++ 4 3 6 7
++ 5 4 8 5
+ 5 8 6 7
± 7 5 3 2
- 3 1 1 0

两组之间比较χ2检验：χ2值分别为2.09,1.85,P＞0.05.


3  讨论

在病毒性肝炎时常常是细胞坏死与凋亡并存,细胞毒T淋巴细胞（CTL）可通过FasL介导Fas阳性的肝细胞凋亡［14-16］. 在乙型、丙型病毒性肝炎及丁型病毒性肝炎均可有Fas/FasL在肝细胞的散在表达,且慢性活动性肝炎的Fas表达明显高于慢性迁延性肝炎，随着肝脏感染程度的加重，Fas抗原的表达也增加［17-25］. 秦波et al［26］在乙型肝炎患者肝组织中证实了Fas/FasL的表达. 我们发现在慢性病毒性肝炎组织中，无论是Fas还是FasL的表达均明显增加，且在肝内炎症、坏死明显区域Fas/FasL的表达也增强，Fas/FasL肝细胞在组织炎症坏死区附近分布也基本一致. 提示肝细胞可能同时表达FasL和Fas,FasL和Fas通过顺式触发使肝细胞发生细胞自杀，或分别表达Fas和FasL的相邻肝细胞相互交联，导致同胞相杀［3,4］. 另外，表达Fas的CTL引起细胞凋亡缺乏特异性，凡是Fas阳性的细胞都可能被激活的Fas L阳性CTL诱导而凋亡，与细胞是否携带病毒抗原无关，而发生所谓的旁观者溶解（Bystander  Lysis）［27-30］. 在慢性病毒性肝炎的病理过程中，这种通过Fas/FasL系统介导的细胞自杀、同胞相杀，是机体为清除肝炎病毒而发生的一种自我保护机制，而旁观者溶解是这种保护过程的副损伤. 如长期清除率差，且对于某些异常突变的肝细胞也不能及时清除，则发展为原发性肝癌. 虽然人们已经认识到肝炎病毒感染与肝癌发生、发展密切相关,但肝炎病毒诱导肝癌的确切机制，尤其是与Fas/FasL介导凋亡的关系还是目前尚不清楚的问题. 在本实验中，正常肝组织仅有少许Fas表达. 在肝癌组织中虽然Fas/FasL的表达水平及表达部位并不完全一致，但总体来说，两者的表达水平均有增加，且在癌组织周围的炎症组织中更为多见，而在癌浸润区则明显减少.　结果提示Fas/FasL结合介导凋亡而限制肿瘤发生与发展的机制存在于病毒性肝炎及肝癌的病理发展过程中.但是如果HBV，HCV基因产物抑制了Fas与FasL的结合，或其基因产物导致Fas在转录过程中剪切方式的改变，使Fas  cDNA编码跨膜区的核酸缺失，从而使转录产物发生变化，进而产生可溶性Fas，使其与膜Fas竞争性与FasL结合，从而抑制凋亡，都可使肝癌细胞得以生存.

4  参考文献

1  Jones RA, Johnson VL, Buck NR, Dobrota M, Hinton RH, Chow SC, Kass GEN. Fas-mediated apoptosis in mouse hepatocytes
    involves the processing and activation of caspases. Hepatology, 1998;27:1632-1642
2  米原 伸. FasとFasリガンド. 医学のぁゅみ，1998；187：305-309
3  守本芳典，日云晶夫，丁 尔迅，田中纪章. Fasリガンド表出にょる癌细胞の免疫系からのェスケ-プ. 临床免疫，1998；30：1031-1035
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5  刘海峰, 刘为纹, 房殿春, 门荣甫, 王振华. 胃癌前病变及胃癌中细胞凋亡及其与FasL表达的关系. 世界华人消化杂志, 1999;7:561-563
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9  大村浩一郎, 桂  义元. T细胞分化とアポト-シス. 医学のあゆみ,1998;187:393-398
10 藤原大美. T细胞とアポト-シス.医学のあゆみ,1998;187:387-392
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12 刘海峰, 刘为纹, 房殿春, 门荣甫. 胃癌和癌旁组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系. 华人消化杂志, 1998;6:321-322
13 Shimizu M, Saitoh Y, Itoh H. Immunohistochemical staining  of Ha-ras oncogene product in normal, benign, and malignant
     human pancreatic tissues. Hum Pathol, 1990;21:607-612 
14 林  纪夫. 肝炎とアポト-シス. 临床医学, 1997;23:1048-1050
15 小笠原 池，长田重一. Fas抗原を介した细胞の死と个体の死. 实验医学，1993；11(增刊)：2293-2298
16 高山  大. Fasの发现によるリンパ球のアポト-シ诱导. 临床免疫，1997；29：543-549
17 林小田, 骆抗先, 任星峰, 何海棠, 朱幼芙, 章廉. 慢性丙型肝炎肝组织Fas抗原和Fas配体表达的原位对比研究.
    华人消化杂志, 1998;6:298-299
18 郭琳琅, 郭颖, 曹长安. 慢性病毒性肝炎