100023 北京市2345信箱 世界华人消化杂志  2000年1月15日;8(1):74-76
Email: wcjd@public.bta.net.cn 世界华人消化杂志  ISSN 1009-3079  CN  14-1260/R
http:// www.wjgnet.com 版权归世界胃肠病学杂志社

⊙研究原著⊙

大肠癌微血管密度及增殖细胞核抗原与临床预后的关系

贾玲1  陈天星2  孙建伟1  纳智明1  张会华2

云南省第一人民医院   1肿瘤科 2病理科   云南省昆明市   650032
贾玲，女，1954-04-12生，云南省昆明市人，汉族，1975年昆明医学院医疗系毕业，外科副主任医师，科副主任，主要从事普外及消化道肿瘤外科的诊治，发表论文7篇.
项目负责人   贾玲，650032，云南省昆明市金碧路172号，昆明市第一人民医院肿瘤科.
Correspondence to Ling Jia， 172 Jin-Bi Road Kunming First People＇s Hospital of Yunnan Province, China
Tel. +86-871-3634031 Ext.2142
收稿日期   1999-06-30   接收日期   1999-11-14


Relationship between microvessel density and proliferating cell nuclear antigen and prognosis in colorectal cancer

Ling Jia1, Tian-Xing Chen2, Jian-Wei Sun1, Zhi-Ming Na1 and Hui-Hua Zhang2

Department of Oncology1 and Pathology2, First People＇s Hospital of Yunnan Province, Kunming 650032, China


Abstract

AIM   To investigate microvessel density (MVD) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in colorectal cancer and its relationship with metastasis and recurrence.

METHODS   Paraffin-embedded specimens from 55 patients with colorectal cancer were examined by SP immunohistochemical method using monoclonal antigen (F-ⅧRAg) and PCNA.

RESULTS   MVD was significantly correlated with differentiation (P＜0.01). It was significantly different from clinical stage (Dukes stage)  and to lymph node or liver metastasis (P＜0.05). It was remarkably different between the cases with recurrence or without (P＜0.01). But the expression of PCNA showed that the poorer the differentiation the higher intensity of expression was, the PCNA increased in cases with metastasis of lymph node or liver, and was significantly different between the cases with postoperational recurrence or without (P＜0.05).

CONCLUSION   MVD and PCNA were related to invasion and metastasis of lymph node or liver. Although there was no obvious metastasis of lymph node  and liver during the operation, the increased MVD and PCNA implied that there were  invasion  or subsets of metastasis, which were risk factors for recurrence and metastasis.

Subject headings   colorectal neoplasms; microvessel density; proliferating cell nuclear antigen; prognosis

Jia L, Chen TX, Sun JW, Na ZM, Zhang HH. Relationship between microvessel density and proliferating cell nuclear antigen and prognosis in colorectal cancer.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,2000;8(1):74-76


摘要

目的   探讨大肠癌微血管密度(MVD)及增殖细胞核抗原(PCNA)与手术后有无潜在性肿瘤转移及复发的相关性.

方法   对55例大肠癌进行术后a的随访及石蜡标本的S-P免疫组化法染色.

结果   大肠癌MVD与其分化程度密切相关(P＜0.01)；与临床病理分期(Dukes＇)间差异有显著意义(P＜0.05)；与有无淋巴结、肝转移密切相关(P＜0.05)；在术后复发与无复发生存者间差异有非常显著性意义(P＜0.01). 增殖活性表达提示，分化愈差，有淋巴结或肝转移时，增殖活性增高，术后复发与无复发生存者之间，增殖活性差异有显著意义(P＜0.05).

结论  大肠癌MVD及PCNA与肿瘤的浸润、淋巴结及肝转移相关. 手术时虽无明显转移，但MVD增高及PCNA活性增强，提示可能有潜在的转移
存在.

主题词 结直肠肿瘤；微血管密度；增殖细胞核抗原；预后

贾玲, 陈天星, 孙建伟, 纳智明, 张会华.大肠癌微血管密度及增殖细胞核抗原与临床预后的关系.世界华人消化杂志， 2000;8(1):74-76


0   引言

近年来，研究发现肿瘤的转移和复发与肿瘤的微血管密度有密切关系，微血管增加，容易发生转移. 本研究运用对大肠癌微血管密度(microvessel density, MVD)及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的联合检测，皆在从分子学角度，为临床上大肠癌手术后评估有否潜在性浸润转移(亚临床转移)或复发的可能，提供预后指标之一，作为临床上估计预后因素及术后辅助化疗的客观依据.

1   材料和方法

1.1   材料   收集我院1991/1992大肠癌切除术后病例及石蜡标本55例，并同时进行随访术后5a生存、复发的情况. 其中男28例，女27例，年龄31岁～85岁，高分化腺癌15例，中分化腺癌18例，低分化腺癌17例(粘液腺癌)，未分化癌5例. Dukes＇分期：A期1例，B期33例，C期21例. 手术当时有淋巴结或肝转移者21例，无淋巴结或肝转移者34例，术后5a内复发转移者15例，无复发生存者19例.

1.2   方法   采用福州迈新生物技术公司提供的单克隆第八因子相关抗原(F～ⅧRAg)试剂和PCNA试剂盒. 将石蜡标本重新切片，用S-P免疫组化法(过氧化酶标记的链霉菌素抗生物素蛋白)染色. MVD呈棕黄色，定位在血管内皮上，在切片中选择MVD密度最高的100倍视野3个进行计数，求其均值. PCNA染色亦呈棕黄色，但定位在细胞核上，根据着色细胞数，＜5%为阴性，≥5%为阳性，5%～30%为(+)，30%～60%为(++)，＞60%以上者为(+++)(阳性增殖活性). 全过程是在双盲情况下进行.
      统计学处理   临床资料及实验数据的统计学处理分别采用等级相关，t检验和χ2检验法.

2   结果

在所有大肠癌组织中均有MVD染色，MVD与其分化程度密切相关，分化越差，MVD越高，差异有非常显著意义(P＜0.01). PCNA表达的总阳性率与分化程度之间差异无显著性意义(P＞0.05). 但从增殖活性表达看，高分化与其他类型之间差异有显著性意义(P＜0.05). 分化越差，增殖活性越高(+++)，见表1，MVD及PCNA与临床病理分期(Dukes＇)的关系：MVD在临床病理分期间差异无显著性意义(P＜0.05). PCNA表达的总阳性率在B期及C期都较高，但两者之间差异无显著性意义. C期的PCNA增殖活性较B期稍增高，差异无显著性意义(P＞0.05)，见表2.
    手术时有无淋巴结或肝转移、术后的复发，均与MVD密切相关，有淋巴结、肝转移时，MVD显著增高(P＜0.05)；手术时无淋巴结或肝转移，但复发者，MVD显著增高，与无复发者之间差异有非常显著性意义(P＜0.01). 在有否淋巴结、肝转移及复发之间PCNA表达的总阳性率都增高，但无显著性差异. 而复发者的PCNA活性较无复发者明显增高(+++)，二者间有显著性差异意义(P＜0.05)，见表3，4.

表1   MVD及PCNA与肿瘤分化程度的关系

分化程度 n MVD计数 PCNA阳性表达率 PCNA增殖活性(%)
n % (+) (++) (+++)
高分化 15 15.7～42.3(x27.78) 9 60.00 5/9(55.55) 3/9(33.33) 1/9(11.11)
中分化 18 20.0～107(x55.68) 18 100.00 4/18(22.22) 5/18(27.78) 9/18(50.00)
低分化 17 29.3～110(x65.97) 12 70.58 2/12(16.67) 2/12(16.67) 8/12(66.67)
未分化 5 53.3～110(x83.40) 5 60.00 0/3(0.00) 1/3(33.33) 2/3(66.67)

表2   MVD及PCNA与Dukes＇分期的关系

Dukes＇分期 n MVD计数 PCNA阳性表达率 PCNA增殖活性(%)
n % (+) (++) (+++)
A 1 23.7 1 1000 　 1/1 　
B 33 47.97±25.99 24 72.72 9/24(37.50) 5/24(20.83) 10/24(41.66)
C 21 64.34±29.847 17 80.95 4/17(23.52) 4/17(23.52) 9/17(52.94)

表3   MVD及PCNA与有无淋巴结、肝转移的关系

　 n MVD计数 PCNA阳性表达率 PCNA增殖活性(%)
n % (+) (++) (+++)
淋巴结肝转移(+) 21 64.343±29.847 17 80.95 3/17(17.6) 5/17(29.4) 9/17(52.9)
淋巴结肝转移(-) 34 47.256±25.930  25 73.52 9/25(36.0) 5/25(20.0) 11/25(44.0)

表4   MVD及PCNA与复发的关系

　 n MVD计数 PCNA阳性表达率 PCNA增殖活性(%)
n % (+) (++) (+++)
淋巴结肝转移(+) 21 64.343±29.847 17 80.95 3/17(17.6) 5/17(29.4) 9/17(52.9)
淋巴结肝转移(-) 34 47.256±25.930 25 73.52 9/25(36.0) 5/25(20.0) 11/25(44.0)
无复发 19 35.079±21.234 13 68.42 6/13(46.2) 4/13(30.8) 3/13(23.1)
复发 15 62.680±23.431 12 80.00 3/12(25.0) 1/12(12.5) 8/12(66.7)



3   讨论

自1991年Weidner首先报道了MVD在乳腺癌转移及预后中的意义. 以后的研究证明在非小细胞肺癌、前列腺癌和胃癌中，MVD与肿瘤转移明显相关. 肿瘤的浸润转移与肿瘤细胞进入淋巴和血循环有关，肿瘤内血管增加，则肿瘤细胞进入血循环的可能性将增加［1-3］. 大肠癌浸润程度和淋巴结、肝转移与MVD的关系亦较密切［4-7］.
     目前临床上对大肠癌手术后预后的估计，仍多采用传统的术中探查有无转移灶，肿瘤的临床病理分期、组织学类型、淋巴转移情况等，对预后作粗略的估计. 对手术时尚无转移的病例，是否有潜在的浸润转移、复发的可能性或亚临床转移，缺乏可靠的客观指标.
    应用免疫组化法对大肠癌MVD及PCNA与临床预后关系进行研究，是从两个不同的方面，反映肿瘤的恶性程度和早期浸润转移的倾向. 大肠癌MVD的检测，是从血管密度与肿瘤的恶性程度、淋巴结及肝转移与复发之间的关系，对临床估计预后，尤其是在手术时，尚未发现有明确的淋巴结或转移灶时，在无法估计是否有潜在转移可能性，提供了一个较传统方法可靠而客观的依据. PCNA是一种较好的判断细胞增殖状态的标记物. 同时检测，则是从肿瘤的细胞增殖状况了解肿瘤的细胞增殖与其恶性程度、转移及复发关系［8-10］，亦为临床估计提供参考依据.
      本组资料表明：分化差，恶性程度高的大肠癌，MVD显著增高，提示术后可能易发生复发和转移. 手术当时无淋巴结或肝转移，以后5a内复发的病例，MVD亦明显增高，说明MVD与肿瘤的浸润转移及复发密切相关，无论是通过淋巴或血循，肿瘤的潜在性转移可能性大，在临床上是具有一定的重要意义的. PCNA的表达，尤其是增殖活性，则反映了与肿瘤的恶性程度及复发的相关性，肿瘤的分化越差，增殖活性越强，复发病例的增殖活性较无复发的显著增强，都表明一方面肿瘤的恶性程度高，另一方面肿瘤细胞增殖快，所以预后差，容易复发转移，可作为判断预后的参考指标.
     研究结果还显示，肿瘤组织分化越差，MVD越高、PCNA的增殖活性越强；复发病例的MVD增高，PCNA的增殖活性亦增强，二者是相关的. 所以，二者的联合检测，对临床估计有否潜在性转移是有一定意义，有较高的敏感性和协同性. 可作为临床上估计预后的一个因素和客观依据之一. 作为大肠癌手术后必要的检测.

4   参考文献

1 Weidner N, Semple JP, Welch WR, Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma.
   N Engl J Med, 1991;324:1-8
2 Maeda K, Chung YS, Takatsuka S, Ogawa Y, Sawada T, Yamashita Y, Onoda N, Kato Y, Nitta A, Arimoto Y, Kondo Y, Sowa M.
   Tumor angiogenesis as a predictor of recurrence in gastric carcinoma.J Clin Oncology,95;13:477-481
3 Maeda K, Chung YS, Takatsuka S, Ogawa Y, Onoda N, Sawada T, Kato Y, Nitta A, Arimoto Y, Kondo Y, Sowa M.
   Tumour angiogenesis and tumour cell proliferation as prognostic indicators in gastric carcinoma. Br J Cancer, 1995;72:319-323
4 Lindmark G, Gerdin B, Sundberg C, Pahlman L, Bergstr m R, Glimelius B. Prognostic significance of the microvascular count in
  colorectal cancer. J Clin Oncol, 1996;14:461-466
5 Tomisaki S, Ohno S, Ichiyoshi Y, Kuwano H, Maehara Y, Sugimachi K. Microvessel quantification and its possible relation with
   liver metastasis in colorectal cancer.Cancer, 1996;77:1722-1728
6 Frank RE, Saciandes TJ, Leurgans S, Speziale NJ, Drab EA, Rubin DB. Tumor angiogenesis as a predictor of recurrence and survival
   in patients with node-negative colon cancer. Annals of Surgery, 1995;222:695-699
7 Chen CS, Fu QG, Liu EQ, Liu XP, Wang MX, Su Q. The relation between microvessel count and invasion and metastasis of
   colorectal cancer. Zhonghua Waike Zazhi, 1996;34:677
8 Xu QW, Li YS, Zhu HG, Huang YG. The relationship of p53 expression  to pathology, PCNA, CEA and the relation between p53,
   PCNA, CEA and lymph node metastasis in colorectal cancer.Guangdong Yixueyuan Xuebao, 1997;15:210-212
9 Huang W, Quan QZ, Dai JX, Feng FC, Wang JD. p53 and PCNA expression in tissue of colorectal cancer.
   Qianwei Yiyao Zazhi, 1997;14:88-89
10 Liao GQ, Yan ZS, Zhang YX, Shen M, Jiang HY. PCNA expression in colorectal cancer with liver metastasis. Zhongguo Putong
     Waike Zazhi, 1996;5:261-263