100023 北京市2345信箱 世界华人消化杂志  2000年2月15日;8(2):156-158
Email: wcjd@public.bta.net.cn 世界华人消化杂志  ISSN 1009-3079  CN  14-1260/R
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⊙研究原著⊙

胃癌及癌前病变组织中CD44v6表达的意义

米建强1 张朝晖2 沈铭昌1

洛阳医学高等专科学校附属医院  1病理科  2病理教研组  河南省洛阳市  471003
3上海医科大学肿瘤医院病理科  上海市  200032
米建强，男，1962-03-09生，河北省邱县人，汉族. 1992年上海医科大学肿瘤医院肿瘤病理学硕士，副主任医师，主要从事胃癌及胃癌前病变发病机制及防治研究，发表论文25篇.
河南省洛阳市科委基金资助课题，No.990018
项目负责人  米建强，471003，河南省洛阳市景华路24号，洛阳医学高等专科学校附属医院病理科.
Supported by the Committee of Science and Technology of Luoyang City, No.990018
Correspondence to  Jian-Qiang Mi, Department of Pathology, Affiliated Hospital of Luoyang Medical College, 24 Jinghua Road,
Luoyang 471003, Henan Province, China
Tel. +86-379-4901440 Ext.2247
收稿日期  1999-09-22  接收日期  1999-11-15


Significance of CD44v6 protein expression in gastric carcinoma and precancerous lesions

Jian-Qiang Mi1, Zhao-Hui Zhang2 and  Ming-Chang Shen3

1Department of Pathology, Affiliated Hospital of Luoyang Medical College, Luoyang 471003, Henan Province, China
2Department of Pathology, Luoyang Medical College, Luoyang 471003, Henan Province, China
3Department of Pathology, Cancer Hospital of Shanghai Medical University, Shanghai 200032, China


Abstract

AIM  To study the relationship between  CD44v6 protein expression and gastric carcinogenesis and behavior of gastric carcinoma.

METHODS  Ten normal gastric mucosas, 43 gastric mucosal dysplasias (including 16 slight, 12 moderate and 14 severe dysplasias), 16 early gastric carcinomas and 52 advanced gastric carcinomas were marked with the monoclonal antibody to CD44v6 protein by using immunohistochemical ABC method. The relationship  between CD44v6 protein expression  the histological type, size  and lymph node metastasis of gastric carcinoma was analysed.

RESULTS  Normal gastric mucosa was negative for CD44v6 protein. The positive rates in dysplasia and gastric carcinoma increased gradually  with the progression of lesions. The positive rates were 12%, 33% and 43% in slight, moderate and severe dysplasias respectively, and was 44% in early gastric carcinoma and 74% in advanced gastric carcinoma. The positive rate  in advanced gastric carcinoma was significantly higher than that in early gastric carcinoma (P＜0.05), and the positive rate of the group with lymph node metastasis was significantly higher than that of the group without lymph node metastasis (82%vs  56%, P＜0.05). In histological types  classified by Lauren＇s, the positive rate of intestinal-type gastric carcinoma was significantly higher than that of diffuse-type gastric carcinoma (78%vs  56%, (P＜0.05), but the expression of CD44v6 protein was not correlated to the size of gastric carcinoma.

CONCLUSION  Gene expression of severe gastric mucosal dysplasia has an obviously latent malignant tendency and gastric carcinoma with the expression of CD44v6 protein has a stronger ability of infiltration and lymph node metastasis.

Subject headings  stomach neoplasm/pathology; precancerous condition/pathology; CD44v6 protein/metabolism

Mi JQ,Zhang ZH,Shen MC.Significance of CD44v6 protein expression in gastric carcinoma and precancerous lesions.
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,2000;8(2):156-158  


摘要

目的  探讨CD44v6基因表达与胃癌发生及胃癌生物学行为的关系.

方法  应用抗CD44v6蛋白的单克隆抗体,采用免疫组化ABC方法对正常胃粘膜(n=10)、各级胃粘膜异型增生(轻度n=16,中度n=12,重度n=14)、早期胃癌(n=16)及进展期胃癌(n=52)进行研究,并与胃癌类型、大小、有无淋巴结转移等作了比较分析.

结果  正常胃粘膜CD44v6为阴性,随着胃粘膜病变的进展,CD44v6蛋白的表达率逐渐升高,至进展期胃癌,表达率达到顶峰.轻、中、重度异型增生表达率分别为12%,33%,43%;早期胃癌及进展期胃癌的表达率分别为44%和73%.各级异型增生表达率之间的差异无显著性,而进展期胃癌表达率显著高于早期胃癌(P<0.05),淋巴结转移组的表达率显著高于淋巴结未转移组(82%vs56%,P<0.05),肠型胃癌的表达率高于弥漫型胃癌(78%vs56%,P<0.05),CD44v6蛋白的表达与胃癌肿块大小无相关性.

结论  胃粘膜重度异型增生在CD44v6基因表达上已具有明显的潜在恶性趋势,CD44v6基因表达阳性的胃癌具有更强的浸润及淋巴结转移的能力.

主题词 胃肿瘤/病理学;癌前状态/病理学;CD44基因蛋白/代谢

米建强,张朝晖,沈铭昌.胃癌及癌前病变组织中CD44v6表达的意义.世界华人消化杂志,2000;8(2):156-158

0  引言

CD44(cluster of differentiation, CD)是一种粘附分子，为细胞表面跨膜糖蛋白，它能介导细胞与细胞或细胞与基质间相互接触和结合的过程［1］. 研究表明，CD44拼接变异体—CD44v6与恶性肿瘤侵袭表型的形成密切相关［1，2］. 我们采用免疫组化方法检测正常胃粘膜、各级胃粘膜异型增生、早期胃癌及进展期胃癌组织中CD44v6基因蛋白的表达，探讨CD44v6蛋白表达与胃癌发生及胃癌生物学行为的关系.

1  材料和方法

1.1  材料  我院1985/1988胃切除标本120例，其中正常胃粘膜10例，轻度异型增生16例，中度异型增生12例，重度异型增生14例，早期胃癌16例，进展期胃癌52例，诊断标准参照全国胃癌协作组病理组规定的标准. 胃癌组织学根据Lauren分型标准，分为两大类，肠型胃癌32例，弥漫型胃癌36例. 所有组织均用100mL/L福尔马林固定，常规石蜡包埋.

1.2  方法  采用免疫组化ABC法，第1抗体为Santa Cruz公司生产的抗CD44v6单克隆抗体. 具体步骤如下：4μm厚石蜡切片常规脱蜡及水化，TBS缓冲液洗涤3次；切片经30mL/LH2O2甲醇液室温下孵育15min，TBS缓冲液洗涤3次，经微波炉抗原修复(250W)20min，取出室温冷却，TBS缓冲液洗涤3次；60mL/L正常马血清保护20min；抗CD44v6单抗(稀释1∶50)孵育30min后，放入4℃冰箱过夜，TBS缓冲液洗涤3次；羊抗鼠IgG血清(稀释1∶200)孵育60min，TBS缓冲液洗涤3次；ABC试剂(稀释1∶100)孵育60min，TBS缓冲液洗涤3次；0.4g/L DAB显色；流水洗涤；苏木素复染、分化、常规脱水、透明及封固. 用TBS替代第一抗体作用空白对照，阳性标准：细胞膜呈现棕黄色为阳性细胞.

2  结果

正常胃粘膜未见CD44v6蛋白的阳性表达，CD44v6在轻、中、重度异型增生中的表达率分别为12%(2/16)，33%(3/16)及43%(6/14)；在早期及进展期胃癌中的表达率分别为44%(7/16)和73%(38/52). 经统计学分析，三级异型增生表达率之间的差异无显著性意义；进展期胃癌的表达率显著高于早期胃癌(P＜0.05).
     在组织学类型上，根据Lauren分型，肠型胃癌的表达率高于弥漫型胃癌，分别为78%(25/32)和56%(20/36)，两者之间的差异有显著性意义(P＜0.05). 按淋巴结有无转移将胃癌分为两组，淋巴结转移组的表达率高于淋巴结未转移组，分别为82%(22/27)和56%(23/41)，两者之间的差异具有显著性(P＜0.05). 按胃癌肿块的最大直径＜5cm或≥5cm分为两组，表达率分别为69%(29/42)和62%(16/26)，两者之间无显著性差异. 在分布上，CD44v6蛋白阳性表达定位于细胞膜. 其中在轻度和中度异型增生中分布有一定极性，主要分布于腺体的腔缘侧胞膜上；而在重度异型增生中，CD44v6蛋白的分布则开始失去这种极性，除上述分布外，在细胞的侧面及基底部胞膜上也见有少量表达；在早期及进展期胃癌中，细胞的各个侧面胞膜上均见强阳性表达(图1，2).

图1  胃粘膜异型增生CD44v6蛋白阳性主要分布于腺体的腔缘侧胞膜上. 免疫组化ABC法×400

图2  肠型胃癌在细胞侧面膜上有CD44v6蛋白阳性表达. 免疫组化ABC法×400


3  讨论

在肿瘤的发生和进展过程中，由于一系列的基因突变，使得一些肿瘤细胞获得浸润及转移的特性，脱离原发瘤，穿透基底膜进入结缔组织，并侵袭淋巴管和血管等组织而发生转移. 显然，肿瘤转移需要通过细胞与细胞间质或与其他细胞的一系列相互作用而完成，其中肿瘤细胞表面 的粘附分子起着重要作用［3，4］.CD44蛋白属粘附分子家族中的一员，人类的CD44基因定位于11号染色体短臂上，有20个高度保守的外显子组成. CD44基因的外显子按表达方式的不同分为两型：一种是组成型外显子，有10个，其转录片段存在于所有CD44转录子中，称标准型CD44(CD44S)；一种是V区变异性拼接外显子，也有10个，含该外显子的CD44转录子统称为CD44拼接变异体(CD44V)［1］. 研究发现，CD44蛋白分子不仅是淋巴细胞的归巢受体，可介导淋巴细胞与血管内皮结合，使淋巴细胞穿过血管壁返回淋巴组织，而且CD44拼接变异体，特别是CD44v6可使癌细胞获得侵袭性的能力，在多种肿瘤的发生及转移过程中起重要作用［3-6］. 我们用抗CD44v6单克隆抗体标记，发现正常胃粘膜为阴性，而在癌前病变及胃癌阶段，CD44v6蛋白的表达率随病变的进展逐渐升高，至进展期胃癌表达率达到顶峰. 这一动态变化似乎表明，CD44v6基因可能参与胃粘膜的癌变过程，此基因的活化及过度表达可能改变胃粘膜上皮细胞上CD44v6分子的分布，导致细胞粘附性及细胞伪足形成的变化，从而对胃粘膜癌变及胃癌侵袭性的形成起重要作用. 在CD44v6阳性分布上，轻、中度异型增生有一定极性，而重度异型增生及胃癌则呈去极性改变，这表明重度异型增生和早期胃癌在基因表达上已具有某些相似性，重度异型增生中CD44v6表达的增强及分布上的去极性，可能预示病变已进入早期癌变阶段，这些变化先于病理形态上的改变.
      研究表明，CD44v6蛋白与肿瘤的生物学行为密切相关，阳性表达的肿瘤浸润性强、易发生淋巴结转移，患者术后复发率高，三年生存率明显降低［4-8］. 本结果支持上述观点，发现进展期胃癌的表达率显著高于早期胃癌(P＜0.05)，淋巴结转移组的表达率明显高于淋巴结未转移组(P＜0.05)，显示CD44v6蛋白表达的胃癌具有更强的侵袭能力，易发生胃周围淋巴结的转移. 术前对胃癌患者进行活检，测定CD44v6的表达情况，有可能早期预测淋巴结转移，对于阳性表达者，术中应更彻底地进行淋巴结清扫，同时术后应严格进行化疗，以预防胃癌的转移及复发.
     胃癌Lauren组织分型中的肠型胃癌与弥漫型胃癌在病因、发病机制及生物学行为上都有所不同. 研究发现，肠型胃癌和弥漫型胃癌CD44v6的表达在转录和翻译水平上均有明显差异［8］. 我们的研究结果与文献报道相似，肠型胃癌CD44v6的表达率明显高于弥漫型胃癌，提示两型胃癌在基因表达上存在着差异.


4  参考文献

1  Gunthert U,Hofmann M,Rudy W,Reber S,Zoller M,Haubmann I,Matzku S,Wenzel A,Ponta H,Herrlich P.A new variant of
    glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells.Cell,1991;65:13-24
2  Kaufmann M,Heider KH,Sinn HP,Minckwitz GV,Ponta H,Herrlich P.CD44 variant exon epitopes in primary breast cancer and length
    of survival.Lancet,1995;345:615-619
3  Wong LS,Cantrill JE,Morris AG,Fraser IA.Expression of CD44 splice variants in colorectal cancer.Br J Surg,1997;84:363-367
4  Strobel T,Swanson L,Cannistra SA.In vivo inhibition of CD44 limits intra abdominal spread of a human ovarian cancer xenograft in
    nude mice: a novel role for CD44 in the process of peritoneal implantation.Cancer Res,1997;57:1228-1232
5  Tanabe KK,Ellis LM,Saya H.Expression of CD44R-1 adhesion molecule in colon carcinoma and metastases.Lancet,1993;341:725-726
6  Harn HJ,Ho LI,Chang JY,Wu CW,Jiang SY,Lee HS,Lee WH.Differential expression of the human metastasis adhesion molecule
    CD44V in normal and carcinomatous stomach mucosa of Chinese subjects. Cancer,1995;75:1065-1071
7  Washington K,Gottfried MR,Telen MJ.Expression of the cell adhesion molecule CD44 in gastric adenocarcinomas.
    Hum Pathol,1994;25:1043-1049
8  Zhang CW,Xu WJ,Zhao ZS,Zou SC.Expression of CD44 splice varian v6 in human gastric cancer.Zhongguo
    Zhongliu Linchuang,1999;26:91-93