| 100023 北京市2345信箱 | 世界华人消化杂志 1999年10月15日;7(10):851-854 |
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⊙研究原著⊙
胰腺癌Bcl-2,P53蛋白表达和细胞凋亡
袁荣文1 丁庆2 姜汉英1 覃修福2 邹声泉2 夏穗生1
1同济医科大学器官移植研究所
湖北省武汉市
430030
2同济医科大学附属同济医院普外科
湖北省武汉市 430030
袁荣文，男，1967-12-22生，浙江省宁波市人，汉族.
1991年同济医科大学毕业，1993年同济医院普外科硕士，1998年同济医院普外科博士，博士论文《细胞周期相关基因在胰腺癌中的改变及其临床预后评价》，现任同济医科大学器官移植研究所主治医师，
从事腹部脏器移植研究.
项目负责人
袁荣文，430030，湖北省武汉市，同济医科大学器官移植研究所.
Correspondence to Rong-Wen
Yuan, Organ Transplantation Research Institute,
Tongji Medical University,
Wuhan 430030, Hubei Province, China
Tel. +86·27·83628286
Email. yuanmd@public.wh.hb.cn
收稿日期 1999-04-28
Bcl-2, P53 protein expression and apoptosis in pancreatic cancer
Rong-Wen
Yuan1, Qing
Ding2,
Han-Ying
Jiang1, Xiu-Fu
Qin2, Sheng-Quan
Zou2 and
Sui-Sheng
Xia1
Organ Transplantation Research Institute, Tongji Medical University, Wuhan
430030, Hubei Province, China
Abstract
AIM To study the mechanism of bcl-2,
P53 genes and apoptosis in carcinogenesis of pancreatic cancer.
METHODS Bcl-2
and P53 protein levels were detected by ABC immunohistochemistry in 50 cases of pancreatic cancer.
Apoptotic cells were detected by in
situ
end labeling.
RESULTS The
positive rate of P53 protein was 54% and much lower in
clinical stage Ⅰ(26.7%)
than in stage Ⅱ (61.1%) and stage Ⅲ+Ⅳ
(70.6%，P＜0.05) . The positive rate of Bcl-2 protein was 64%
and much higher in clinical stage Ⅰ (93.3%) than in stage Ⅱ
(55.6%) and stage Ⅲ+Ⅳ (47.1%，P＜0.05). Apoptosis index was much lower in histological
grade Ⅰ than in grade Ⅱ and Ⅲ
(P＜0.05)，much higher in Bcl-2 (-) than in Bcl-2 (+) cases (P＜0.01).
CONCLUSION Bcl-2
may indirectly promote the carcinogenesis of pancreatic cancer as an important gene inhibiting
cell apoptosis. The relationship between Bcl-2 and P53 protein expression was
reversely correlated (τ=-0.1747，P＜0.05).
Subject headings pancreatic neoplasms; bcl-2 gene; P53 gene; gene expression; apoptosis
Yuan RW, Ding Q, Jiang HY, Qin XF, Zou SQ, Xia SS.
Bcl-2, P53 protein expression and apoptosis in pancreatic cancer.
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7(10):851-854
摘要
目的
探讨bcl-2,p53基因和细胞凋亡在胰腺癌发病机制中的作用以及它们之间相互关系.
方法
应用ABC免疫组化技术检测50例胰腺癌中Bcl-2和P53蛋白表达,运用原位末端标记法观察肿瘤中细胞凋亡数量.
结果 P53蛋白表达阳性率为54%,临床Ⅰ期阳性率(26.7%)却显著低于Ⅱ期(61.1%)和Ⅲ+Ⅳ期(70.6%,P<0.05);Bcl-2蛋白表达阳性率为64%,临床Ⅰ期阳性率(93.3%),显著高于Ⅱ期(55.6%)和Ⅲ+Ⅳ期(47.1%,P<0.05);组织学Ⅲ级癌细胞中凋亡指数明显高于Ⅰ,Ⅱ级(P<0.05),Bcl-2蛋白阴性病例中凋亡指数明显高于Bcl-2阳性者(P<0.01).
结论 Bcl-2是通过抑制细胞凋亡参与肿瘤的生长过程,Bcl-2和P53蛋白表达之间存在密切负相关(τ=-0.1747,P<0.05).
主题词 胰腺肿瘤;bcl-2基因;p53基因;基因表达;细胞凋亡
袁荣文, 丁庆, 姜汉英, 覃修福, 邹声泉, 夏穗生.胰腺癌Bcl-2,P53蛋白表达和细胞凋亡.世界华人消化杂志,1999;7(10):851-854
0 引言
大量研究表明，细胞凋亡受癌基因和抑癌基因调控，包括bcl-2，c-myc，P53, Fas/Apo-1［1］等.
bcl-2(B-cell
lymphoma/leukemia-2)基因定位在18q21，最初发现于滤泡淋巴瘤患者中，该基因与14q 32易位，结合在免疫球蛋白重链位点，导致淋巴瘤细胞中26kD Bcl-2蛋白的过度表达.
越来越多实验证实，bcl-2基因通过其编码的Bcl-2蛋白抑制细胞凋亡，许多恶性肿瘤中该蛋白表达异常，与恶性肿瘤发生发展和预后有密切关系［2］. 我们利用免疫组化技术研究胰腺癌中Bcl-2和P53蛋白表达，运用原位末端标记法观察肿瘤中细胞凋亡数量，以探讨bcl-2和p53基因和细胞凋亡在胰腺癌发病机制中的作用以及它们之间相互关系.
1 材料和方法
1.1 材料
50例胰腺癌标本取自本院病理科1990/1996胰十二指肠切除手术标本，所有标本均经100mL/L福尔马林固定，常规石蜡包埋. 其中男31例，女19例，年龄17岁～68岁，平均47.9岁. 病理分类：腺管性腺癌30例，乳头状腺癌8例，腺泡细胞腺癌9例，粘液腺癌3例. 组织学分级：高分化10例，中等分化24例，低分化16例，临床Hermrec KAS分期：Ⅰ期(局部病变)15例，Ⅱ期(侵及周围组织)18例，Ⅲ期(区域淋巴结转移)12例，Ⅳ期(远处转移)5例.
1.2 方法
1.2.1 Bcl-2蛋白免疫组织化学染色
SABC及DAB显色试剂盒购自武汉Boster(博士德)公司，Bcl-2单克隆抗体购自Dako公司，染色方法采用免疫组化SABC法. 阳性对照：已知甲状腺瘤Bcl-2染色阳性细胞. 阴性对照：PBS代替一抗. 结果判定：细胞胞质染色(图1)，胞核阴性，以切片中阳性细胞数≥5%为阳性病例.
1.2.2 P53蛋白免疫组织化学染色
P53单克隆抗体购自美国Zymed公司，其他主要试剂及染色方法同上. 阳性对照：已知胃癌P53表达阳性细胞. 结果判定：阳性信号为棕黄色颗粒，位于肿瘤细胞胞核(图2)，胰腺癌细胞核染色＞10%定为P53蛋白染色阳性.
1.2.3 原位末端标记法
主要试剂：Dig-dUTP, dNTP, Klenow酶，NBT，购自德国Boehringer
Mannheim Biochemica公司，操作步骤按试剂盒说明进行. 结果判定：凋亡细胞核呈紫蓝色，染色不均，散状分布于肿瘤组织中，每例标本随机取5个高倍视野(400倍)，至少计数1000个细胞中凋亡细胞所占的百分比，即凋亡指数(apoptosis index, AI).
统计学处理
χ2检验，P53与Bcl-2蛋白表达相互关系用Kendall等级相关分析.
2 结果
2.1 Bcl-2蛋白在胰腺癌中的表达
50例胰腺癌中32例表达阳性，阳性率为64%. Bcl-2蛋白表达与胰腺癌组织学类型、组织学分级、临床分期的关系如表1所示，Bcl-2蛋白表达在不同组织学类型和组织学分级间无显著性差异，而在不同临床分期间存在显著性差异(P＜0.05)，在Ⅰ期(93.3%)、Ⅱ期(55.6%)中表达率明显高于Ⅲ，Ⅳ期(47.1%).
表1 Bcl-2蛋白表达与胰腺癌病理类型、组织学分级和临床病理之间的关系
|
类型 |
n | Bcl-2蛋白表达阳性 | |
| n | 阳性率(%) | ||
| 病理类型 | |||
| 腺管性腺癌 | 30 | 23 | 76.7 |
| 腺泡细胞腺癌 | 8 | 4 | 50.0 |
| 乳头状腺癌 | 9 | 5 | 55.6 |
| 粘液腺癌 | 3 | 0 | 0.0 |
| 组织学分级 | |||
| Ⅰ | 10 | 8 | 80.0 |
| Ⅱ | 24 | 15 | 62.5 |
| Ⅲ | 16 | 9 | 56.3 |
| Hermrec KAS分期 | |||
| Ⅰ期 | 15 | 14 | 93.3 |
| Ⅱ期 | 18 | 10 | 55.6 |
| Ⅲ+Ⅳ期 | 17 | 8 | 47.1 |
2.2 P53蛋白在胰腺癌中的表达
50例胰腺癌中27例P53表达阳性，阳性率为54%，临床Ⅰ期阳性率(26.7%)显著低于Ⅱ期(61.1%)和Ⅲ+Ⅳ期(70.6%)(P＜0.05).
2.3 Bcl-2和P53蛋白表达的相互关系
如表2所示，胰腺癌Bcl-２阳性病例中P53阳性表达率为40.6%(13/32)，Bcl-2阴性病例中P53阳性表达率为77.8%(14/18)，两者之间存在密切负相关(τ=-0.1747，P＜0.05).
表2 胰腺癌P53与Bcl-2蛋白表达之间的关系
| P53 | Bcl-2(+) | Bcl-2(-) | τ* | P* |
| (+) | 13 | 14 | -0.1747 | ＜0.05 |
| (-) | 19 | 4 |
*等级相关检验采用Kendall法.
图1 高分化胰腺乳头状腺癌Bcl-2蛋白阳性，主要位于胞质.
×400
图2 组织学Ⅲ级胰腺乳头状腺癌P53蛋白染色阳性，位于胞核.
×400
图3 凋亡细胞在胰腺癌中呈片状分布.
×400
2.4 胰腺癌中细胞凋亡检测结果
50例胰腺癌标本全部可见凋亡细胞，凋亡细胞多呈散在点状分布，部分呈片状或块状分布(图3). 为进一步统计分析，根据凋亡指数大小将病例分为3组：+(AI≤1%)，++(1%＜AI≤3%)，+++(AI＞3%). 如表3所示，凋亡指数与胰腺癌组织学分级相关，组织学Ⅲ级癌细胞中凋亡指数明显高于Ⅰ，Ⅱ级，不同病理类型和临床分期中凋亡细胞数无显著性差异，Bcl-2蛋白阴性病例中凋亡指数明显高于Bcl-2阳性者(图4)，含突变型P53基因与含野生型P53基因的胰腺癌中凋亡指数无显著性差异(图5).
表3 细胞凋亡与胰腺癌关系
| 类型 | n | 凋亡细胞 | ||
| + | ++ | +++ | ||
| 病理类型 | ||||
| 腺管性腺癌 | 30 | 12 | 14 | 4 |
| 腺泡细胞腺癌 | 8 | 2 | 2 | 4 |
| 乳头状腺癌 | 9 | 5 | 3 | 1 |
| 粘液腺癌 | 3 | 0 | 1 | 2 |
| 组织学分级 | ||||
| Ⅰ | 10 | 5 | 4 | 1 |
| Ⅱ | 24 | 6 | 14 | 4 |
| Ⅲ | 16 | 8 | 2 | 6 |
| Hermrec KAS分期 | ||||
| Ⅰ期 | 15 | 10 | 4 | 1 |
| Ⅱ期 | 18 | 6 | 8 | 4 |
| Ⅲ，Ⅳ期 | 17 | 3 | 8 | 6 |
| P53+ | 27 | 7 | 11 | 9 |
| P53- | 23 | 12 | 9 | 2 |
| Bcl-2+ | 32 | 18 | 8 | 6 |
| Bcl-2- | 18 | 1 | 12 | 5 |
图4 凋亡和Bcl-2